摘要
背景：重症急性胰腺炎(Severeacutepancreatitis,SAP)是由酒精、胆石症等引起胰蛋白酶过度激活导致的胰腺炎症，多伴有全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭，病死率高，没有特效药。临床上多采用补液、抑制胰酶分泌、禁食水及对症治疗。此外，中医药在SAP治疗上也发挥巨大优势。中医采用《伤寒论》中的经典方剂“大承气汤”治疗SAP，临床疗效显著。大黄素是“大承气汤”中君药大黄的主要有效单体，药理作用与大黄相似，但其水溶性较差，临床应用受限。因此，如何增加大黄素水溶性、提高生物利用度，对扩大大黄素临床应用范围及途径、提高治疗效果等均具有重要意义，而将中药单体制成纳米粒是解决此类问题的有效手段。其中，脂质体作为一种药物载体，能使药物靶向定位于特定的组织，减少或降低药物的毒性。 目的：①制备甘露糖接枝大黄素靶向脂质体（Mannose-chitosan-emodin-lipidnanocapsules，M-CS-E-LNC），增加大黄素水溶性；②在细胞和动物水平上考察M-CS-E-LNC的抗炎效果，并初步探讨其抗炎机制。 方法：利用脂质体作为药物载体，以大黄素作为治疗药物，利用薄膜超声法制备大黄素脂质体，并在表面接枝甘露糖，制备大黄素靶向脂质体，以达到提高大黄素水溶性，抑制SAP炎症反应的作用。 结果：①成功制备出粒径为73nm±1.573，PDI为0.189±0.059，包封率为72.98%，载药量为0.36%的脂质体；②利用MTT法及EthD-1法确定M-CS-E-LNC对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的安全浓度为2.0μg/mL；③M-CS-E-LNC能够抑制LPS诱导的RAW264.7炎症因子的释放；④与对照组相比，M-CS-E-LNC能够显著降低小鼠胰腺病理评分，减轻胰腺损伤；⑤M-CS-E-LNC能够促进SAP小鼠中抗炎因子IL-10的释放；⑥激光共聚焦显微镜观察显示，脂质体分布于RAW264.7细胞的胞膜和胞浆；⑦蛋白印迹及免疫荧光显示M-CS-E-LNC能够显著抑制LPS导致的磷酸化p65表达增多及IκB的降解，M-CS-E-LNC能够抑制LPS导致的NF-κBp65的核易位；⑧光学显微镜观察显示，经100ng/mLLPS及20ng/mLIFN-γ诱导24h后，RAW264.7形态发生明显改变，出现大量伪足，并可见细胞空泡化，呈M1型样变化；而M-CS-E-LNC组细胞伪足较少，呈圆形或梭形样M2型样改变；RT-qPCR及流式细胞术结果进一步证明，M-CS-E-LNC组iNOS、TNF-α、IL-6、CCR2及表面标志物CD86表达降低，Arg-1/iNOS、IL-10及CD206表达增多。以上实验结果均表明M-CS-E-LNC促进了巨噬细胞RAW264.7从M1型向M2型极化；⑨以正常C57BL/6小鼠及吲哚菁绿（ICG）作为对照，利用小动物活体成像技术考察M-CS-E-LNC在SAP小鼠体内的缓释及靶向作用。结果显示，在SAP小鼠中，M-CS-LNC的缓释效果及靶向效果显著优于对照组，并且在胰腺、肺脏和肝脏中高表达。⑩组织分布显示，除胰腺外，M-CS-E-LNC组在肝脏、肺脏、肠道和血清中的大黄素含量均显著高于对照组。 结论：①M-CS-E-LNC制备方法成熟稳定，可显著增加大黄素的水溶性；②M-CS-E-LNC能够减轻SAP小鼠炎症反应，该现象或与巨噬细胞极化有关；③SAP组小鼠中的M-CS-E-LNC具备缓释及靶向功能。
NETL