摘要
目的： 在本研究中，我们通过基因捕获技术筛选了 RB1基因的结构突变，并对基因型表型相关性进行了初步探索。 方法： 2019.5～2021.5收集北京同仁医院经病理学检查确诊RB患者的45例福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPE)与经散大瞳孔眼底检查、眼部超声、CT扫描/MRI确诊的12例RB患者外周血。45例FFPE患者中男性23例，女性22例，年龄4月～10岁。12例外周血患者中男性7例，女性5例，年龄8月～4岁。通过设计RB1基因外显子及侧翼序列的靶向捕获探针，提取DNA进行测序分析，检测其RB1基因突变情况。 结果： (1)45例FFPE组织中41例均有RB1基因突变表现，4例为非RB1基因突变。FFPE组织中发现3例新的致病基因突变、1例新的可能致病基因突变。 (2)12例外周血标本检测结果均有RB1突变，外周血组织中发现3种新的可能致病基因突变。 (3)在检出的FFPE组织中41例患者存在RB1突变，其中33例为致病突变，包括20个终止突变，8个缺失移码突变，3个插入移码突变以及2个剪接突变;4例为可能致病突变，包括3个剪接突变，1个插入非移码突变;3例为不确定意义突变，均为非同义突变;1例为无致病性的内含子/非翻译区发生的突变。 (4)12例静脉血样本全部表现有RB1突变，其中3例为致病突变，包括1个缺失移码突变，2个终止突变;6例可能致病突变，3例不确定意义突变，均为非同义突变。 (5)45例FFPE组织中，4例为非RB1突变，主要表现为睾丸特性蛋白Y基因、锌指蛋白基因207、锌指蛋白基因618、Otopetrin3、无精子症缺失基因，21例除外RB1突变外合并其它类型突变，主要表现为上述5种类型及溶血磷脂酸受体6。 (6)外周血样本中有6个样本除外RB1突变外存在其它基因突变，主要表现为溶血磷脂酸受体6和睾丸特性蛋白Y基因。 (7)本次试验中选取1例患者进行FFPE组织和外周血DNA同时进行测序，该患者的FFPE组织和外周血DNA测序结果显示存在相同突变位点，提示外周血检测在一定程度上能够达到检测目的，且临床上静脉血便于采集。 结论： 该研究采用以目标区序列捕获为基础的新一代测序平台对患者FFPE及外周血DNA进行RB1基因测序，可以同时检测拷贝数个和单个碱基的突变，是一种成本低、高效的视网膜母细胞瘤基因测序方法。通过对56例小儿RB患者的致病基因RB1进行突变检测，共发现7个新生突变。这补充了 RB1基因的突变谱，有助于提高RB的分子诊断水平，从而为RB的遗传咨询和临床表型预测以及RB患者后代的遗传检测提供依据。除外RB1突变外高频发生的LPAR6突变是否参与了 RB的发生，有待进一步研究。
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