摘要
目的：牙髓炎是临床常见的口腔疾病之一，在我国具有较高的发病率，如果早期阶段未给予及时有效治疗，将造成牙髓和周围组织的不可逆损伤。组织病理学上指出牙髓炎的早期阶段主要表现为牙髓内的血管扩张，炎细胞浸润和局部组织的液化坏死。“活髓保存”是牙髓炎早期阶段的主要治疗方法，指去除感染的牙体硬组织及受累牙髓，在接近牙髓的牙本质表面或已暴露的牙髓创面上，覆盖具有使牙髓病变恢复效应的制剂，促进盖髓区域形成硬组织屏障。目前临床上用于保存活髓的制剂多为生物化学材料，难以完全避免细胞毒性问题，缺乏诱导牙髓牙本质复合体再生的能力。另外活髓保存治疗的术前及术中无法准确判断牙髓的炎症程度及范围、把握牙髓组织的去留程度，术后根管感染复发和牙髓组织坏死也是导致治疗失败的主要原因。 人牙髓干细胞(Human Dental Pulp Stem Cells,hDPSCs)作为间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)的一种，具有很强的自我更新和修复组织、器官的能力，在再生医学中具有很大的应用潜力，已成为组织工程研究的热点。本研究通过细胞学和动物试验，将牙髓干细胞作用于早期炎症牙髓组织中，观察牙髓干细胞能否对早期炎症牙髓组织在炎症恢复中产生正向调节作用，探究其是否可以作为一种新型的组织工程来源材料取代传统生物化学型盖髓剂，实现牙髓组织的“理想愈合”以及牙髓功能的“完全恢复”。 本研究由以下两部分组成： 一、牙髓干细胞条件培养基(Conditioned Medium,CM)对炎症牙髓干细胞(Inflammatory-hDPSCs,i-hDPSCs)生物学功能的影响。 分离和培养人类健康和炎症牙髓组织来源的牙髓干细胞，获取健康牙髓干细胞条件培养基，将其作用于炎症牙髓干细胞，通过CCK-8、细胞划痕、矿化诱导后的茜素红染色及Ca2+检测、实时定量荧光PCR实验，体外检测健康牙髓干细胞对炎症牙髓干细胞在细胞增殖、迁移、矿化、基因表达等生物学功能方面的影响。 二、牙髓干细胞和生物盖髓剂对早期炎症牙髓盖髓效果的比较。 建立SD大鼠下切牙牙髓炎动物模型，分别进行“hDPSCs盖髓+玻璃离子充填”与“iRoot BP盖髓+玻璃离子充填”，通过RT-PCR和HE染色观察和比较两种不同方法处理后，牙髓组织炎症恢复以及修复性牙本质形成的情况。 实验结果： 1、炎症牙髓干细胞与健康牙髓干细胞的生物学功能相比，前者在细胞增殖、迁移、矿化等方面表现出较低的生物学活性，二者差异具有统计学意义(P＜0.05)。牙髓干细胞条件培养基对炎症牙髓干细胞在细胞增殖、迁移、成血管与矿化功能方面表现出显著的正向调节作用，与常规培养基相比差异具有统计学意义(P＜0.05)。 2、hDPSCs与iRoot BP盖髓相比较，RT-PCR检测结果显示hDPSCs盖髓组牙髓组织炎症转归良好，炎性因子表达量显著低于iRoot BP组，矿化相关mRNA的表达量显著高于iRoot BP组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。HE染色组织学观察发现iRoot BP组可见露髓孔周围大量细胞空泡变性伴局部炎症细胞浸润，髓室壁不连续，周围区域可见不规则、多孔隙、不连续的钙化组织;hDPSCs组的髓室壁周围区域可见局部红细胞外渗与散在的单核炎症细胞，髓室壁周围修复性牙本质较为连续。 结论： 牙髓干细胞可促进早期牙髓组织病变的自行愈合，有助于为临床中的“活髓保存”提供新的临床诊疗思路与方法。
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