摘要
目的:通过实验观察芪锦颗粒对阿霉素肾病大鼠24h-UPr、生化指标、肾组织形态、足细胞相关蛋白nephrin、podocin蛋白及自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达的影响，从分子生物学角度探究芪锦颗粒治疗阿霉素肾病大鼠蛋白尿的作用机制，为探讨该药物的临床应用提供实验依据。 方法:选取6周龄SPF级SD雄性大鼠65只，适应性喂养1周后随机抽取10只作为空白组，余下55只即为造模组，造模组采用分两次尾静脉注射的方法建立阿霉素肾病大鼠模型，以尿蛋白定量≥100mg/24h为模型复制成功，剔除造模期间死亡大鼠及造模后蛋白尿未呈阳性的大鼠后，将造模成功后的50只阿霉素肾病大鼠随机分为模型组、芪锦颗粒高、中、低剂量组、醋酸泼尼松组，每组10只。造模成功后各组大鼠持续灌胃治疗6周，药物干预期间，观察各组大鼠一般状态，并于造模2周末及给药第4、6周末用清洁代谢笼收集大鼠24h尿样，记录24h尿蛋白量。6周后腹主动脉采血检测血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）等生化指标含量，并留取肾脏标本，通过HE、PAS、Masson染色观察肾组织的病理变化情况，免疫荧光检测大鼠足细胞nephrin、podocin蛋白的表达，采用Western-Blot检测LC3及Beclin-1的表达量。 结果:1.一般情况:经药物干预后的大鼠，在精神状态、反应度、饮食量、尿量、毛色光泽度等方面较模型组有不同程度的改善。 2.24小时尿蛋白定量:给药4、6周后同期各组之间相比较，与空白组比较，模型组及各药物干预组24小时尿蛋白定量明显升高（P＜0.05）;与模型组比较，同期各药物干预组24小时尿蛋白定量明显减少（P＜0.05）。 3.血生化指标:给药6周末，与空白组比较，模型组大鼠血肌酐、尿素氮、甘油三酯、总胆固醇值升高，血清白蛋白值降低（P＜0.05）;与模型组比较，芪锦颗粒组与醋酸泼尼松组均能明显升高血清白蛋白（P＜0.05），降低血肌酐、尿素氮、总胆固醇、甘油三酯（P＜0.05）。 4.HE、Masson、PAS染色后各组大鼠肾组织病理变化:给药6周后光镜示，空白组大鼠肾组织肾小球形态结构清晰，系膜基质部及系膜细胞未见增生、坏死，肾小管管腔正常，未见蛋白管型及淋巴细胞浸润;模型组肾小球可见肿胀，系膜细胞及基质增生，并伴有局灶性或节段性瘢痕形成，肾小管可见颗粒变性，管腔内出现蛋白管型，部分区域可见肾小管萎缩;芪锦颗粒中、高剂量组及醋酸泼尼松组光镜下肾小球稍肿胀，系膜细胞及基质轻度增生，部分可见球囊粘连，肾小管管腔形态改变，蛋白管型较模型组轻，间质少量淋巴细胞浸润。芪锦颗粒低剂量组较模型组变化不明显。 5.免疫荧光结果示:给药6周末，模型组、芪锦颗粒组、醋酸泼尼松组nephrin蛋白、podocin蛋白的表达与空白组比较均下降（P＜0.05）;与模型组相比，芪锦颗粒组、醋酸泼尼松组nephrin蛋白、podocin蛋白的表达明显增高（P＜0.05）。 6.Western-Blot检测结果示:给药6周末，与空白组比较，模型组大鼠LC3、Beclin-1表达强度降低（P＜0.05）;与模型组比较，各给药组LC3、Beclin-1表达强度均增高（P＜0.05）。 结论:1.芪锦颗粒能够改善阿霉素肾病大鼠一般状态，降低血清总胆固醇、甘油三脂、血肌酐、尿素氮水平，提高血清白蛋白水平，减少尿蛋白排泄量、保护肾功能及减轻肾脏病理损害。 2.芪锦颗粒可能通过上调阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin及podocin蛋白的表达，修复损伤的肾脏，从而减少蛋白尿。 3.芪锦颗粒可能通过上调阿霉素肾病大鼠肾组织中LC3及Beclin-1表达，增强肾脏足细胞的自噬活性，从而修复损伤的足细胞，改善肾小球滤过功能，减少尿蛋白排泄量，延缓肾病进展。
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