摘要
目的:建立“肾阳虚”PHN大鼠模型，并基于NLRP3/Caspase-1信号通路，探究温针灸对“肾阳虚”PHN大鼠的止痛调控机制。 方法: 第一部分:30只SD大鼠适应性喂养一周后，随机分为空白对照组和模型组,模型组采用甲巯咪唑灌胃联合足底接种水痘-带状疱疹病毒，建立“肾阳虚”PHN大鼠模型。观察比较大鼠的中医症候体征变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中cAMP、cGMP浓度的变化;接种病毒3天后，随机各抽取5只大鼠采集脊髓组织进行HE染色;并于接种病毒前以及接种后第3、7、14、21、28天对其机械缩足反射阈值(PWT)和热刺激缩足反射阈值(TWL)进行检测。 第二部分:将100只SD雄性大鼠适应性喂养一周后，随机分为2组，正常组20只，造模组80只。造模组大鼠参照第一部分造模方法建立“肾阳虚”PHN大鼠模型。模型建立成功后，随机分为:模型组、温针灸组、抑制剂组及温抑组(n=20)。温针灸组大鼠进行温针灸治疗，抑制剂组进行腹腔注射NAC溶液，温抑组大鼠进行温针灸联合抑制剂干预治疗;连续干预2周。于造模前、造模完成后第3天和干预的第3、7、14天进行疼痛行为学检测;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠脊髓组织中相关基因(NLRP3mRNA、Caspase-1 mRNA)及蛋白(NLRP3、Caspase-1)的表达水平;ELISA法检测各组大鼠血清中IL-6、TNF-α水平。 结果: 第一部分:肾阳虚PHN模型构建完成后，模型组大鼠肾阳虚症候体征评分显著高于空白对照组(P＜0.05);模型组大鼠体重及增长量均小于空白组(P＜0.05);模型大鼠肛温较空白对照组显著降低(P＜0.05);模型组大鼠血浆cAMP、cAMP/c GMP水平较空白对照组显著降低，血浆cGMP水平显著升高(P＜0.05)。行为学检测中模型组大鼠的PWT和TWL显著降低(P＜0.05),痛阈在7至14天时下降最快，于第21天降至最低。并在大鼠脊髓组织病理切片中我们可以观察到Model组大鼠的髓鞘变性肿胀，脂质空泡的形成，并可观察到神经元被病毒感染后的包涵体。 第二部分:在肾阳虚PHN模型大鼠构建成功后，脊髓中NLRP3.Caspase-1蛋白、NLRP3 mRNA、Caspase-1 mRNA以及促炎因子IL-6、TNF-α的表达均显著上调，并且均出现持续性的机械异常性疼痛及热敏疼痛(P＜0.05)。经温针灸及抑制剂干预至第7-14天时，NLRP3和Caspase-1的蛋白及基因的相对表达量明显下降(P＜0.05),促炎因子IL-6、TNF-α的表达均显著下降(P＜0.05),其中温针灸对肾阳虚PHN大鼠脊髓中NLRP3炎症小体的影响与注射NAC的治疗结果相似(P＞0.05),温针灸联合抑制剂的运用治疗效果优于单独接受温针灸或抑制剂治疗(P＜0.05)。 结论: 1、甲巯咪唑灌胃联合足底接种水痘-带状疱疹病毒可成功建立肾阳虚带状疱疹后遗神经痛大鼠模型，并且该模型具有可复制性。 2、水痘-带状疱疹病毒引起的免疫和炎症反应是导致带状疱疹后遗神经痛大鼠出现疼痛敏感性的生物学基础。温针灸夹脊穴可通过下调NLRP3炎症小体及炎症因子的表达，从而缓解带状疱疹病毒引起中枢痛觉过敏及周围神经系统的损伤。 3、温针灸联合ROS抑制剂的镇痛起效时间及其效果明显优于单用温针灸或抑制剂，二者或存在协同作用。
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