摘要
目的： 包其络赛在彝族医药临床上用于治疗风湿病，现代药理学研究该药具有抗类风湿作用。为了进一步深入研究，本课题以佐剂性关节炎（CFA）大鼠为体内实验研究对象，筛选包其络赛抗类风湿关节炎（RA）作用的最佳活性部位；采用MH7A细胞作为体外实验载体，探究对映-海松烷型二萜类化合物长白楤木酸（PA）对FLS增殖和凋亡的作用机制。 方法： 1. 包其络赛不同提取部位抗 RA 作用的筛选 构建 CFA 大鼠模型，通过分析各组大鼠关节炎指数评分、体重、足容积、免疫器官指数、组织病理形态学、炎性细胞因子分泌、MMPs 和核转录因子 κB的表达，筛选包其络赛抗RA的最佳活性部位。 2. 包其络赛石油醚部位的分离纯化 采用硅胶柱层析方法分离和纯化包其络赛石油醚部位，通过 NMR 和 ESI-MS鉴定化合物结构。 3. PA 对 MH7A 细胞增殖、凋亡及其作用机制的影响 CCK-8和Transwell实验检测PA对MH7A细胞增殖活力、侵袭和伤口愈合能力的影响，AnnexinV-FITC/PI 双染和 PI 单染分别结合流式细胞术检测 PA 对细胞凋亡和细胞生长周期的影响，ELISA检测PA对MH7A分泌炎性细胞因子、MMPs和VEGF的影响，WB检测PA对凋亡蛋白Bax/Bcl-2和NF-κB信号通路的影响。 结果： 1. 包其络赛石油醚部位可有效抑制 CFA 大鼠 RA 样症状 CFA大鼠体内实验发现包其络赛石油醚部位明显降低大鼠AI评分、左右足容积、免疫器官指数，增加体重，减轻滑膜关节的组织病理损伤，降低血清中炎性细胞因子的分泌，降低MMPs和核转录因子κB的表达，具有明显的抗RA作用。 2. 包其络赛石油醚部位分离纯化得到 1 个对映-海松烷型二萜类化合物长白楤木酸PA。 3. PA 可抑制 MH7A细胞增殖和凋亡 体外细胞实验发现PA可显著降低MH7A细胞的增殖率，其IC50为（69.13 ±6.82） μM，显著减弱 MH7A细胞的侵袭和伤口愈合能力，并将细胞周期阻滞于G2/M期，诱导细胞凋亡，降低炎性细胞因子、MMPs和VEGF的分泌，下调NF-κB p65 和 IKKα的蛋白表达水平。 结论： 包其络赛石油醚部位有效缓解了CFA大鼠的RA样病变，其分离得到的化合物长白楤木酸PA可通过下调NF-κB信号通路，干扰FLS生长周期并诱导其发生凋亡，减弱 FLS 的增殖、迁移和侵袭能力，抑制炎性细胞因子、VEGF 和MMPs的释放。
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