摘要
烧伤是局部皮肤受高温刺激引起的损伤，是日常发生的常见类外伤。目前国内外烧伤中药外用制剂主要为湿润烧伤膏及部分民间制剂、医院制剂等，本课题旨在验证吴氏侗药烧伤油治疗烧伤的安全性及有效性，期望挖掘出一种可治疗Ⅱ度烧伤的药物，为烧伤患者治疗提供更多选择方案。 目的 采用实验的方法，对来自贵州黔东南吴氏侗药烧伤油的安全性进行评价，并通过治疗烧伤、镇痛、抗炎和抑菌等实验研究其吴氏侗药烧伤油药效学，为其临床安全性和疗效性提供科学依据。 方法 (一)安全性实验 安全性实验主要通过皮肤急性毒性实验、皮肤刺激性实验、皮肤过敏性实验三个实验来评价吴氏侗药烧伤油外用的安全性。 1.大鼠皮肤急性毒性实验:取30只SD大鼠随机分为3组，每组10只，分别为正常组、皮肤完整组、皮肤破溃组。正常组不做任何处理，皮肤完整组和皮肤破损组在受试区涂抹吴氏侗药烧伤油，观察给药后四个时间段大鼠受试区是否有皮肤水肿红斑等，全身体质量、全身外观、日常活动、饮食、大小便等有无异常等中毒反应，判断吴氏侗药烧伤油的药物毒性。 2.大鼠皮肤刺激性实验:取20只SD大鼠分为2组，每组10只，分别为皮肤完整组、皮肤破损组，采用同体左右侧自身对比法进行涂药，左右侧分别涂吴氏侗药烧伤油和生理盐水进行对照观察，连续7d,依据给药部位及全身皮肤红斑和水肿情况，判定吴氏侗药烧伤油对皮肤的刺激性。 3.豚鼠皮肤过敏性实验:取30只Hartely白色豚鼠分为3组，每组10只，分别为阴性组、阳性组和给药组，在各组豚鼠左侧背部致敏给药3次，右侧背部激发给药1次。激发给药后分别在四个不同时间段，分别观察各组豚鼠背部及全身，记录红斑、水肿等过敏反应症状及评分，判断吴氏侗药烧伤油对皮肤的过敏性。 (二)药效学实验 药效学实验主要通过烧伤、镇痛、抗炎、抑菌四个实验来评价吴氏侗药烧伤油的药效学。 1.烧伤实验:48只SD大鼠分为4组，每组12只，分别为正常组、模型组（生理盐水）、给药组（吴氏侗药烧伤油）、阳性组（湿润烧伤膏），四组动物脱毛后，除正常组外，其余各组在大鼠背部建立Ⅱ度烧伤模型。除正常组外各组连续给药21天。四个时间段分别在每组中随机选择3只大鼠，观察大鼠皮肤愈合情况，称重计算愈合面积，通过HE染色法观察创面皮肤组织变化，检测肝肾功能，通过创面愈合情况、肝肾功能评价吴氏侗药烧伤油治疗烧伤的作用。 2.镇痛实验:通过热板法实验、扭体实验测定给药前后镇痛作用的变化来评价吴氏侗药烧伤油的镇痛作用。60只KM小鼠，选取30只用于热板法实验，30只用于扭体实验，每组10只，分为阳性组、给药组、阴性组。①热板法实验:记录每组小鼠的初始痛阈值，连续给药后于第5天、第7天分别测定痛阈值，计算三次痛阈值变化。②扭体实验:腹部涂药7天后30min,腹腔注射冰醋酸，分别记录各组小鼠在注射后15min出现的扭体次数，并根据扭体次数计算镇痛率。 3.抗炎实验:通过足底注射角叉菜胶后足趾、二甲苯刺激后耳部、烧伤前后炎症因子TNF-α和IL-6的含量变化来观察吴氏侗药烧伤油对炎症的治疗效果。选取30只SD大鼠用于足趾肿实验，30只KM小鼠用于耳廓肿实验，每组10只，分为阳性组、给药组、阴性组。①足趾肿实验:足趾给药7天后;于第8天，测量各组大鼠右后足作为致炎前足容积，在右后足皮下注射角叉菜胶后使其致炎，分别记录致炎前后各个时间段足容积变化。②耳廓肿实验:两耳连续给药7天。第8天，取100μL二甲苯在右耳前后分别滴取50μL,耳部肿胀后立马处死，沿耳根剪取左右耳，打孔后称重，计算耳廓肿胀度。③ELISA实验，选取烧伤实验组48只SD大鼠，分别检测四组大鼠在0、7、14、21d血清中TNF-α和IL-6的含量。 4.抑菌实验:运用纸片法观察吴氏侗药烧伤油对常见细菌的抑菌效果，制作含药纸片和培养基后，将铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌均匀涂布在琼脂培养基上，将浸有药液的圆纸片按顺序放置，分别是空白组、植物油组、湿润烧伤膏组、吴氏侗药烧伤油组、阳性组;培育24h后，通过抑菌圈大小评价吴氏侗药烧伤油对常见细菌的抑菌作用。 结果 （一）安全性试验:通过大鼠急性毒性实验、皮肤刺激性实验表明吴氏侗药烧伤油未见皮肤急性毒性，未见皮肤刺激性，通过皮肤过敏实验表明吴氏侗药烧伤油对豚鼠皮肤无致敏性，表明吴氏侗药烧伤油具有较好的安全性。 （二）药效学实验 1.大鼠烧伤实验:烧伤面积中，与模型组比较，在第7到21天，给药组创口面积明显缩小（P＜0.01），烧伤过程中，与阳性组比较，给药组创面干燥、无感染情况;通过HE组织染色法，与各组相比，给药组创面愈合时间短，表皮无明显疤痕，大鼠肝肾功能结果未发现异常变化。 2.镇痛实验:①热板实验:与阴性组比较，给药后第5天、第7天，给药组、阳性组痛阈显著提高（P＜0.01）;给药组与阳性组比较，痛阈值一致，无统计学意义，②扭体实验:给药7天后，与阴性组相比，给药组、阳性组扭体次数减少（P＜0.01），阳性组与给药组比较，扭体次数具有显著性差异（P＜0.01）,给药组、阳性组镇痛率分别提高了28.45％、56.64％; 3.抗炎实验:①足趾肿实验:与阴性组比较，给药组、阳性组注射角叉菜胶后0.5-4h内，均具有统计学差异（P＜0.05），给药组与阳性组比较，注射角叉菜胶后第0.5-4h内，给药组与阳性组无统计学意义。②耳廓肿实验:与给药组、阳性组耳廓肿胀度明显减小，具有显著性差异（P＜0.01）;给药组与阳性组比较，差异无统计学意义。③在Elisa试剂盒结果表明:在抑制烧伤后血液内TNF-α表达中，吴氏侗药烧伤油优于湿润烧伤膏;在抑制烧伤后血液内IL-6表达中，吴氏侗药烧伤油和湿润烧伤膏疗效一致。 4.抑菌实验:接种铜绿假单胞菌与表皮葡萄球菌的培养皿中吴氏侗药烧伤油组有抑菌圈形成，接种金黄色葡萄球菌的培养皿中吴氏侗药烧伤油无抑菌圈形成。 结论 吴氏侗药烧伤油对皮肤无肤无毒性、刺激性、致敏性、肝肾功能无损伤，对Ⅱ度烧伤具有促进创面愈合、镇痛、抗炎、抑菌的作用。
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