摘要
目的:研究蛇莓提取物对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡、周期及EGFR/MEK/ERK信号通路蛋白表达的影响，丰富蛇莓提取物的抗肺癌机制，对全面了解蛇莓的药理作用及寻找低毒、高效的中药协同或辅助抗肺癌具有重要意义。 方法:选取蛇莓提取物(Duchesneaindicaextract,DIE)作为研究对象，运用CCK-8实验探究不同剂量(0μg/ml、31.25μg/ml、62.5μg/ml、125μg/ml、250μg/ml、500μg/ml、1000μg/ml、2000μg/ml、4000μg/ml、8000ng/ml)蛇莓提取物对肺腺癌A549细胞增殖抑制作用，筛选出最佳药物剂量;观察Annexin-Ⅴ-FITC/PI双染法检测空白组(DIE0μg/ml)和不同剂量DIE实验组(700μg/ml、3500μg/ml、5000μg/ml)、特异性抑制剂组(AG147826.35μm)干预24h后，各组A549细胞凋亡情况;采用流式细胞术(FlowCytoMetry,FCM)检测不同剂量DIE干预A549细胞24h后细胞周期变化的情况;采用蛋白免疫印迹(WesternBlot,WB)实验探究不同剂量DIE作用于A549细胞24h后EGFR、ERK1/2、MEK、p-EGFR、p-ERK1/2、p-MEK蛋白的表达。统计分析使用SPSS26.0、GraphPadPrism5软件处理。 结果: 1.CCK-8实验结果表明:DIE处理A549细胞24h后，在0μg/ml-8000μg/ml剂量范围内，呈剂量依赖性抑制细胞增殖。综合分析及评估，选取5000μg/ml、3500μg/ml、700μg/ml作为最佳高、中、低剂量组作用于A549细胞，三个剂量组的增殖率均明显低于空白组，高剂量药物组效果更优，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 2.流式细胞术检测细胞凋亡结果表明:与空白组相比，高、中、低剂量(5000μg/ml、3500μg/ml、700μg/ml)DIE组、特异性抑制剂组(AG1478)处理肺腺癌A549细胞24h后，凋亡率均明显高于空白组，差异具有统计学意义(P＜0.05),高剂量药物组与特异性抑制剂组无显著差异(P＞0.05)。 3.流式细胞术检测细胞周期结果表明:高、中、低剂量的DIE处理肺腺癌A549细胞后，细胞在G0/G1期所占百分比分别为(69.53±0.60)％、(57.05±1.88)％、(50.59±1.16)％较空白组(43.04±0.84)％显著升高，差异具有有统计学意义(P＜0.05)。在S期，高、中、低剂量组所占百分比分别为(16.06±1.40)％、(31.28±0.153)％、(36.410±1.78)％,高、中剂量组所占百分比较空白组(41.08±2.16)％显著降低(P＜0.05)。在G2/M期，抑制剂组所占百分比(6.38±1.45)％较空白组(15.89±2.51)％显著降低(P＜0.05)。 4.Westernblot实验结果表明:高、中、低剂量的DIE呈剂量依赖性方式下调p-ERK1/2（0.377±0.066、0.575±0.098、0.681±0.134、空白组为0.825±0.148）、p-MEK（0.245±0.032、0.341±0.021、0.455±0.033、空白组为0.0572±0.047）、p-EGFR（0.297±0.013、0.408±0.016、0.561±0.042、空白组0.674±0.019）蛋白的表达。 结论: 1.高、中、低剂量组蛇莓提取物均能一定程度上抑制A549细胞的增殖、诱导A549细胞的凋亡，高剂量组效果更明显。 2.蛇莓提取物能使A549细胞停滞在G0/G1期、S期，阻滞细胞周期进程。 3.蛇莓提取物能下调p-EGFR、p-ERK1/2、p-MEK蛋白的表达，可能抑制EGFR/MEK/ERK信号通路的传导，抑制A549细胞增殖、促使细胞凋亡、影响细胞周期推进，发挥抗癌效果。
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