摘要
大口黑鲈（Micropeterussalmoides）是中国淡水养殖重要的鱼类品种之一，随着我国大口黑鲈养殖业迅速发展，养殖规模和养殖密度不断增加，大口黑鲈病毒性疾病频繁发生，其中，由大口黑鲈虹彩病毒（LargemouthBassIridovirus,LMBV）引起的大口黑鲈溃疡综合征对养殖业造成了严重危害。LMBV感染的一个显著特征是其临床变异性，不同地域环境、不同养殖管理方式和饲料等因素，导致感染LMBV的大口黑鲈患病症状差异较大，经常没有特征性的临床症状，很难通过临床症状进行诊断，主要表现为一部分受感染的鲈鱼种群爆发了大规模的死亡，而另一部分受感染的种群并不表现任何症状。同时，LMBV并无针对性、有效性的防控及治疗手段，因此，LMBV的早期鉴定对大口黑鲈养殖业异常重要。 为制备能够应用于LMBV早期病原检测所需单克隆抗体，本研究选择高度保守、具有病毒特异性表面抗原的LMBV主衣壳蛋白（MajorCapsidProtein,MCP）为检测靶蛋白，利用原核表达系统表达LMBV-MCP重组蛋白并免疫BALB/c小鼠，将免疫小鼠脾B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP/20）融合，经亚克隆筛选、小鼠腹腔接种、收集腹水等过程获得单克隆抗体；利用免疫印迹、间接免疫荧光、免疫组化技术对所制备的单克隆抗体免疫识别的特异性以及其识别的抗原表位进行了研究分析。本研究获得了1株单克隆抗体2C9-6；特异性分析结果提示，2C9-6可以特异性识别真核表达LMBV-MCP和LMBV病毒颗粒；抗原表位分析结果表明2C9-6识别的抗原表位位于LMBV-MCP蛋白N端第1-30位氨基酸构成的肽段中；本文对2C9-6单克隆抗体可变区序列进行测序分析，得到了单克隆抗体2C9-6可变区碱基、氨基酸序列，为基因工程抗体研发提供了基础；本文对抗LMBV-MCP单克隆抗体的制备研究为进一步开展LMBV检测，尤其是为适于养殖现场检测应用的LMBV免疫胶体金检测试纸条研制及基因工程疫苗抗体研发提供了基础。
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