摘要
黏菌素（Colistin,COL）是一种阳离子多肽，对革兰阴性菌有较强的抗菌活性，被认为是治疗多重耐药革兰阴性菌感染的“最后一道防线”。但随着黏菌素使用的日益增加，黏菌素耐药菌特别是质粒介导的mcr-1耐药菌株不断出现，迫切需要新的治疗策略来对抗多重耐药革兰阴性菌感染。两种或多种药物的联用，尤其是抗菌药物与非抗菌的佐药联用是一种有前途的的克服耐药性的有效方法。氯硝柳胺（Niclosamide,NIC）对大多数革兰阴性菌无抗菌效果，前期已有研究表明，将NIC与COL联用能协同逆转沙门菌的黏菌素耐药性，但由于NIC水溶性差，与水溶性的黏菌素复配制成复方溶液、注射液或可溶性粉十分困难，因此两药联用在动物临床上的应用与推广面临很大的挑战。本研究旨在制备一种分散性高、吸收均匀、见效快、生物利用度高、可混饮及适合群体给药的黏菌素-氯硝柳胺复方泡腾干混悬剂，建立其质量标准，并在此基础上研究黏菌素-氯硝柳胺复方泡腾干混悬剂的体内外抗菌效果，包括对人工感染沙门菌雏鸡存活率、脏器病理损伤及肝脏细菌载量的影响，为新剂型的研究开发及兽医临床应用提供依据。 以沉降体积比为指标，采用单因素法筛选合适的助悬剂、润湿剂、填充剂及泡腾剂，采用正交优化法设计三因素四水平正交优化试验，以沉降体积比和混悬状态良好范围为指标得到NIC泡腾干混悬剂配方，在此基础上按COL∶NIC=1∶2加入COL，并根据混悬状态调整配方，得到最终黏菌素-氯硝柳胺复方泡腾干混悬剂配方：COL5%，NIC10%，助悬剂A58%，润湿剂B15%，无水柠檬酸20%，碳酸氢钠4%，反絮凝剂C320%，乳糖28%。制备工艺为：提前将各辅料过80目筛备用，分别称取药物及各辅料，先将NIC和润湿剂B1放入粉碎机中，充分粉碎混匀，再将COL及其他辅料一并加入粉碎机，充分混匀即得。 参考《中国兽药典》对制备的COL-NIC复方泡腾干混悬剂进行质量评价，建立了COL和NIC的含量测定方法，并进行了稳定性研究。结果显示：沉降体积比为1、再分散性为1~2次、干燥失重为1.3%，均符合要求；以NIC混饮200ppm给药浓度为基础，将制备的泡腾干混悬剂分别按混饮浓度浓缩20倍（4000ppm）、30倍（6000ppm）、40倍（8000ppm）、50倍（10000ppm）、60倍（12000ppm）加常水搅匀制成混悬液，静置24h，混悬状态均良好且无药物沉淀；采用高效液相色谱法测定复方制剂中NIC的含量为101.35mg/g，采用生物测定法测定COL的含量为48.35mg/g，且稳定性、精密度、重复性以及加样回收率均符合要求；傅里叶红外光谱分析发现：药物与辅料混合后，其主要成分结构基本没有发生改变；稳定性研究发现：制备的COL-NIC复方泡腾干混悬剂在高温、高湿环境下会结块，故应于密封、避光、阴凉处储存。 进一步对制备的COL-NIC复方泡腾干混悬剂进行体内外药效学研究，通过最小抑菌浓度试验和时间-杀菌曲线试验验证了复方制剂对耐COL沙门菌的抗菌效果，并分别以半数致死剂量和亚致死剂量建立两种人工感染沙门菌雏鸡模型，设置复方制剂高、中、低不同剂量用药组，通过对感染雏鸡存活率、体重增长、盲肠、肝脏和脾脏的病理损伤以及感染雏鸡肝脏的细菌载量来分析判定治疗效果。结果表明：COL-NIC复方泡腾干混悬剂与COL单药相比其抑菌效果增强了2~32倍，时间-杀菌曲线试验中复方制剂组与COL组相比，菌落数减少均大于2log10CFU/mL，复方制剂相较于COL单药抑菌效果明显增强，与药敏结果基本一致。在体内药效学研究中，通过肌肉注射的方式建立沙门菌感染模型，通过灌胃的方式给药治疗。以半数致死剂量感染的雏鸡，经治疗后发现复方制剂高、中、低治疗组的存活率分别71.4%、85.7%、57.1%，较COL单药治疗组存活率分别提高了57.1%、71.4%、42.8%，差异显著（p＜0.01）；以亚致死剂量感染的雏鸡，经治疗后相较于COL单药治疗组，复方制剂治疗组平均体重显著上升（p＜0.01），显著降低了感染雏鸡肝脏中的细菌载量（p＜0.01），感染雏鸡肝脏、脾脏和盲肠的病理损伤状况得到了有效缓解，减轻了肝细胞脂肪变性、肠绒毛上皮细胞脱落、脾脏细胞结构紊乱等情况，表明COL-NIC复方泡腾干混悬剂对人工感染沙门菌雏鸡有良好的治疗效果。 综上所述，本研究所制备的COL-NIC复方泡腾干混悬剂可在一系列浓度范围内任意加水搅匀后混饮使用，且分散速率快，混悬状态稳定，质量符合要求规定；相较于COL单药抑菌效果明显增强，不仅显著提高了雏鸡的存活率，还促进了其平均体重的增长，对感染雏鸡肝脏、脾脏和盲肠的病理损伤情况得到了有效缓解，且显著降低了感染雏鸡肝脏中的细菌载量，有进一步开发应用于兽医临床的巨大潜力。
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