摘要
根管治疗的关键在于感染控制，根管消毒是控制根管系统感染的重要步骤之一。氢氧化钙是目前国内外最常用的根管消毒剂。但是，现在的成品氢氧化钙制剂存在对一部分细菌的杀菌性不足、难以从根管完全清除等局限性。苯扎氯铵为季铵盐类的阳离子表面活性剂，氯离子水解后残余的阳离子集团可改变细菌细胞浆膜的渗透性，使菌体细胞浆物质外渗，阻碍其代谢而起到杀灭细菌的作用，对革兰阳性细菌作用较强。已有实验表明，在根管冲洗液或根管封闭糊剂中加入苯扎氯铵可提高其抗菌性。因此，本实验探索苯扎氯铵对氢氧化钙根管消毒剂抗菌性及细胞毒性的影响，为氢氧化钙根管消毒糊剂的改良提供实验依据。 目的:探讨苯扎氯铵对氢氧化钙根管消毒剂抗菌性及细胞毒性的影响，为氢氧化钙根管消毒糊剂的改良提供思路和实验依据。 方法:1.药物浓度梯度配制:预实验分组按Ca(OH)2糊剂中苯扎氯铵添加量分为A-F组。A-F组苯扎氯铵浓度分别为0.05％、0.1％、0.5％、1％、1.5％、0,其中，F组为对照组。通过琼脂扩散法检测含苯扎氯铵的氢氧化钙糊剂对具核梭杆菌的抗菌性，通过细胞毒性实验检测含苯扎氯铵的氢氧化钙糊剂对细胞增值的影响。实验结果表明:苯扎氯铵添加浓度为0.1％时，抗菌性增强，细胞毒性无显著变化。苯扎氯铵添加浓度为0.5％时，抗菌性增强，细胞毒性显著增强，不符合临床使用安全性。因此，在0.5％以下按照浓度梯度设计后续实验苯扎氯铵添加浓度。考虑到后续抗菌性实验部分的检测菌种增加了牙龈卟啉单胞菌，其抗菌性结果可能与具核梭杆菌有差别，因此，苯扎氯铵添加的最低浓度仍从0.05％开始。设计苯扎氯铵添加浓度梯度分别为0、0.05％、0.075％、0.1％、0.15％、0.2％、0.3％、0.4％。 2.抗菌性实验:采用琼脂扩散法检测上述8组氢氧化钙糊剂对牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌的抗菌性，拍照、测量并记录抑菌环直径（抑菌环直径=抑菌环最大径-孔径）。将牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌细菌悬浮液调整至浓度为3×108CFU/mL,加入含有上述8种不同浓度氢氧化钙糊剂的24孔板中，通过直接接触法比较各组药物的抑菌效果。采用SPSS20.0软件，经方差齐性及数据正态性检验后，采用单因素方差分析（One-wayANOVA）对各组实验结果进行统计分析，组间两两比较采用Tukey检验，p＜0.05为差异有统计学意义。 3.细胞毒性实验:取生长良好的第4代人牙周膜成纤维细胞,稀释至1×105个/ml的浓度用于接种培养。同时，用含青霉素、链霉素双抗的DMEM培养基浸提上述不同浓度的8种药物。实验组为8种不同浓度药物的浸提液与人牙周膜成纤维细胞共培养。对照组为含青霉素、链霉素双抗的DMEM培养基与人牙周膜成纤维细胞共培养。空白组仅为含青霉素、链霉素双抗的DMEM培养基。然后在实验组、对照组、空白组中均加入cck-8试剂，测定吸光度值（OD值），判断各浓度药物浸提液对细胞的毒性强弱。通过吸光度值计算细胞相对增殖率（relativegrowthrate,RGR）:细胞相对增殖率=（实验组溶液吸光度-空白组溶液吸光度）/（对照组溶液吸光度-空白组溶液吸光度）×100％。 结果:1.琼脂扩散实验:加入苯扎氯铵的氢氧化钙糊剂组相比于不加入苯扎氯铵的氢氧化钙糊剂组，对牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌的抗菌性均显著增强（P＜0.05）。对于具核梭杆菌:当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.05％、0.075％、0.1％时，三组间其抗菌性无显著差异（P＞0.05）;当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.15％、0.2％时，两组间其抗菌性无显著差异（P＞0.05）;当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.4％时，抗菌性最强（P＜0.05）。对于牙龈卟啉单胞菌:当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.05％、0.075％、0.1％时，三组间其抗菌性无显著差异（P＞0.05）;当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.15％、0.2％时，两组间其抗菌性无显著差异（P＞0.05）;当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.3％、0.4％时，两组间其抗菌性无显著差异（P＞0.05）;当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.3％时，抗菌性最强。 2.直接接触实验:对于具核梭杆菌，当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.05％、0.075％时，其抗菌性与不加入苯扎氯铵的氢氧化钙糊剂组无显著差异(P＞0.05)。之后，随着氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度的提高，抗菌性增强(P＜0.05)。对于牙龈卟啉单胞菌，当氢氧化钙糊剂内加入苯扎氯铵后，其抗菌性显著增强。 3.细胞毒性实验:单纯的氢氧化钙糊剂对HPLFs具有极轻微毒性。当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.05％、0.075％、0.1％、0.15％、0.2％时，HPLFs细胞增值率与不加入苯扎氯铵的氢氧化钙糊剂组无显著差异(P＞0.05)。其中，当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度为0.05％、0.075％、0.1％、0.15％时，HPLFs细胞增值率反而有所提高，细胞毒性级为无毒性。当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度提高至0.3％、0.4％时，HPLFs细胞增值率显著降低(P＜0.05),细胞毒性评级为极轻微毒性。当氢氧化钙糊剂中加入苯扎氯铵浓度提升至0.4％时，其细胞毒性评级为中度毒性。 结论:通过添加苯扎氯铵可提高氢氧化钙糊剂的抗菌性。同时，将添加浓度控制在小于或等于0.2％时，可不提高氢氧化钙糊剂的细胞毒性。该实验可能为氢氧化钙类根管消毒剂的改良提供新的思路，但仍需要通过临床实验进一步验证。
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