摘要
漆酶（E.C.1.10.3.2）是一种多酚氧化酶，被广泛应用于降解木质纤维素、纸浆漂白、纺织工业、食品工业等工业领域。目前商品化的漆酶多数源自真菌，但它们在高温和碱性条件下不稳定，这限制了它们的应用。细菌来源的漆酶相比于真菌来源的漆酶而言，细菌漆酶具有良好的热稳定性，其中芽孢杆菌来源漆酶具有更为耐高温、耐碱等优势，因此继续挖掘芽孢杆菌来源的漆酶，进行耐热改造及应用研究具有显著的意义。 本研究的主要内容及结果如下： （1）对实验室前期筛选到的一株产漆酶细菌鉴定分析，该菌株为沙福芽孢杆菌，将此菌株命名为BacillussafensisTCCC111022，该漆酶基因全长有1530个碱基，可编码510个氨基酸。 （2）构建重组质粒pET-lac并在大肠杆菌中异源表达和纯化，对重组漆酶（rLAC）进行酶学性质分析，rLAC最适温度为80℃、最适pH值为5.0，在80℃以下、pH3.0-9.0时活力稳定。 （3）利用rLAC和rLAC-介体（1-羟基苯并三唑，HBT）降解碱提取木质素产物为：4-羟基苯甲酸、苯甲酸、2,4-二叔丁基苯酚、对羟基苯乙酮、丁香醛、阿魏酸、香草醛等物质。 （4）利用迭代突变对rLAC进行热稳定性改造，筛选得到了突变体E231D/Y441H，该突变体在80℃下的半衰期比rLAC提高183%。 （5）分别利用rLAC和突变体-HBT协同商品纤维素酶降解玉米秸秆和甘蔗渣，在加HBT处理时，甘蔗渣糖化效率比对照提高235%。
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