摘要
蝉花（Cordyceps）俗称大虫草，也称大蝉草菌、虫花等，属于菌物界，子囊菌门，粪壳菌纲，虫草菌科，是一种珍贵的药食同源的真菌。其无性型蝉拟青霉（Paecilomycescicadae）感染蝉科山蝉幼虫后所形成的虫菌复合体即为蝉花，目前很多研究都证实了蝉花子实体和菌丝体多糖的免疫活性，对蝉花胞外多糖的免疫活性研究较少，免疫调节机制尚不清楚。本研究对蝉花菌进行液体发酵培养，从发酵液中分离纯化得到一种新的胞外多糖，并对该胞外多糖进行结构分析，同时评价了其对RAW264.7细胞的免疫调节活性。主要研究结果如下： （1）以胞外多糖得率为指标，对蝉花菌液体发酵培养基配方进行优化，单因素和正交实验结果表明，蝉花菌产胞外多糖的最佳发酵培养基配比为：葡萄糖4%，蛋白胨1.5%，MgSO40.2%和KH2PO40.05%，胞外多糖含量达5.40g/L。 （2）对发酵液进行离心后取上清液进行减压浓缩，用乙醇对浓缩液进行醇沉过夜，收集沉淀用蒸馏水复溶后进行透析，真空冷冻干燥后得到粗多糖。使用DEAE-52纤维素离子交换柱柱层析和Sephadex葡聚糖凝胶柱G-150对粗多糖进一步纯化，得到胞外纯多糖PC-EPS。采用苯酚硫酸法测得多糖含量为98.87%，比旋光度为-75°，高效液相色谱法测得分子量为1.071×103KDa。通过气质联用分析其单糖组成，得到PC-EPS由甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成，相对摩尔比为28.84∶1∶19.42。通过FT-IR、高酸氧化和smith降解、NMR以及甲基化分析可知，PC-EPS的糖苷键连接类型为→6)-α-D-Manp(1→，→2)-β-D-Manp(1→，→4)-α-D-Manp(1→，→2)-α-D-Galf(1→，→4)-α-D-Galp(1→)。 （3）细胞实验结果表明：蝉花菌胞外多糖PC-EPS可促进RAW264.7细胞的增殖，并显著提高RAW264.7细胞的吞噬能力。PC-EPS还可以通过提高细胞内溶菌酶、细胞酸性磷酸酶和细胞SOD酶的含量，以及促进细胞内NO、TNF-α和IL-6等细胞因子的产生来调节RAW264.7细胞的免疫活性。
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