摘要
目的： PA（Pseudomonasaeruginosa，铜绿假单胞菌）是一种常见的医院感染病原体，可在患有慢性阻塞性肺疾病、囊性纤维化、癌症、创伤、烧伤及免疫缺陷个体中发生感染。近年来，随着广谱抗生素的广泛使用，使得MDR（multidrug-resistant，多重耐药）的PA引起的感染变得越来越常见。多粘菌素B是为数不多的对MDR-PA仍然有效的药物，但近年来也有关于其对多粘菌素B耐药的报道。PA耐多粘菌素B的机制比较复杂，目前还未被完全阐释清楚，不断有新的有关调控基因位点突变介导耐药的研究报道出现。本研究通过阶梯式诱导的方式，获得了一株对多粘菌素B耐药的PA菌株。全基因组测序结果显示其pmrB第514-516位碱基发生了缺失，但机制不明。本课题拟通过同源重组等方法，阐明上述突变对多粘菌素B耐药的影响及其机制。 方法： 1.通过阶梯式诱导的方式获得PA针对多粘菌素B的自发耐药株； 2.利用同源重组技术构建PA-pmrB△514-516突变株； 3.通过微量肉汤稀释法，检测多粘菌素B在野生株、自发耐药株及点突变株中的MIC（Minimuminhibitoryconcentration，最低抑菌浓度）； 4.通过RNA-seq（RNAsequencing，转录组测序）和RT-qPCR（ReversetranscriptionquantitativePCR，逆转录荧光定量PCR）进一步研究PA的pmrB△514-516与耐多粘菌素B的机制。 结果： 1.自发耐药株的MIC与野生株的MIC相比，提高了4倍，表明成功诱导出耐药菌株； 2.自发耐药株全基因组测序结果显示，其pmrB基因第514-516位碱基发生了缺失； 3.经同源重组，PCR及测序验证，PA-pmrB△514-516突变株构建成功； 4.与野生株相比，突变株对多粘菌素B的最低抑菌浓度提高了4倍； 5.与野生株相比，突变株的pmrA、pmrB和操纵子arnBCADTEF的表达量均提高。 结论： PA的pmrB第514-516位点的碱基在抗多粘菌素B中发挥着重要的作用；该位点的碱基缺失突变可介导PA对多粘菌素B产生抗性；突变后引起的pmrA、pmrB和操纵子arnBCADTEF基因表达量的升高，可能是PA对多粘菌素B耐药的机制。
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