摘要
口腔鳞状细胞癌（OSCC）属于头颈部恶性肿瘤，目前，OSCC的治疗方法已经有了很大的进步，但患者的不良预后和术后的复发转移等情况仍然不容乐观。因此，需要对OSCC的发生原因进行探索，对OSCC的疾病发展机制进行研究，以明确OSCC的治疗靶点，为OSCC患者提供更安全有效的治疗策略。金属纳米粒子可以用于肿瘤的诊断和治疗，具有促进肿瘤细胞通过类芬顿反应发生铁死亡的作用。金纳米粒子生物相容性好，表面易修饰，是肿瘤治疗领域的热门材料，锰纳米粒子因其优异的成像能力，成为肿瘤成像诊断的常用材料。将金纳米粒子和锰纳米粒子相结合，有潜力作为肿瘤治疗的有效策略。铁死亡是细胞程序性死亡，发生铁死亡的细胞会积累脂质过氧化物。增加细胞内的活性氧（ROS）水平可诱导肿瘤细胞发生铁死亡。谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）和核因子?红细胞2相关因子2（NRF2）是参与细胞铁死亡过程的关键调节基因。在真核生物的核糖核酸（RNA）修饰中，N6-甲基腺苷（m6A）甲基化修饰最为常见，在OSCC的发生发展中发挥着多功能作用。m6A去甲基化酶脂肪和肥胖相关基因（FTO）在OSCC患者中高表达，并在OSCC的迁移和侵袭中起作用。已有研究确认了FTO能够调节GPX4的表达，从而诱导肿瘤细胞铁死亡。鉴于细胞对金属纳米粒子的吸收效率有限，需要选择合适的药物载体，以提升金属纳米粒子的治疗作用。外泌体是细胞分泌的膜性囊泡，是药物递送系统有应用前景的载体。自然杀伤（NK）细胞能够特异性作用于肿瘤细胞，在肿瘤免疫中起到重要作用。NK细胞分泌的外泌体兼具二者的优势。因此，利用NK细胞外泌体作为金属纳米粒子的递送载体是OSCC治疗的良好选择。 本研究首先制备合成金锰纳米粒子（AuMn），利用CCK-8、ROS检测、线粒体定位实验、JC-1染色以及线粒体透射电镜（TEM）等实验，验证AuMn对SCC9细胞线粒体结构和功能的影响。通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹（WB）探究AuMn处理SCC9细胞后GPX4、NRF2和SLC7A11的表达，验证AuMn诱导SCC9细胞发生铁死亡。随后，利用qRT-PCR和WB验证AuMn处理后SCC9细胞中FTO的表达。通过划痕愈合和细胞侵袭（Transwell）amp;nbsp;实验探究FTO在OSCC中的表达模式及作用。利用RNA-seq分析了FTO的下游因子，验证FTO可以调节GPX4的表达，从而抑制SCC9细胞的迁移和侵袭，以确认AuMn诱导SCC9细胞铁死亡的作用机制。进一步使用超滤法提取NK细胞外泌体，将NK细胞外泌体与AuMn结合形成复合体Exo-AuMn，并利用qRT-PCR和WB验证Exo-AuMn处理对SCC9细胞FTO、GPX4、NRF2和SLC7A11表达的影响。最后利用OSCC异种移植小鼠模型，在体内验证了AuMn的荧光成像特性和抑制OSCC生长的能力。结果表明： 1.AuMn促进SCC9细胞ROS的生成，抑制细胞的迁移和侵袭，定位于细胞线粒体，破坏线粒体结构和功能，促进SCC9细胞的铁死亡。 2.AuMn通过FTO/GPX4作用通路抑制SCC9细胞的迁移和侵袭，诱导SCC9细胞发生铁死亡。 3.Exo-AuMn通过FTO/GPX4通路诱导SCC9细胞发生铁死亡，在OSCC异种移植小鼠模型中显著抑制肿瘤的生长。 综上，本研究证明Exo-AuMn能通过FTO/GPX4作用通路诱导SCC9细胞发生铁死亡反应，并且在体内显著抑制OSCC的生长，在OSCC的治疗中具有良好的应用前景。
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