摘要
支原体病在我国猪场普遍存在，严重危害养猪业健康发展，给国民经济造成重大损失。猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）和猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis，Mhr）是最主要的两种致病性猪支原体病原。Mhp感染引起猪支原体肺炎（mycoplasmal pneumonia of swine，MPS），俗称猪气喘病，是一种以咳嗽、气喘、生长发育不良、高发病率和低死亡率为主要特征的慢性、接触性呼吸道传染病。同时，Mhp感染可引起呼吸道上皮纤毛损伤和免疫抑制，容易诱导其他病原产生继发感染，进一步形成地方性肺炎（enzootic pneumonia，EP）和猪呼吸道疾病综合征（porcine respiratory disease complex，PRDC）。Mhr在猪群中感染率极高，普遍存在于猪的上呼吸道，在一定条件下可引起猪多发性浆膜炎、关节炎、肺炎、咽鼓管炎、中耳炎等多种炎症。且据报道Mhr感染亦与胃癌等人类癌症相关，给人类健康带来重要威胁。疫苗接种是传染病预防的最佳手段，目前我国市场上有针对Mhp的活疫苗及灭活疫苗，但接种率仅30%左右，而尚无Mhr疫苗产品可用。抗生素药物治疗仍是防控Mhp和Mhr感染的最主要的方式之一。支原体病在我国猪场广泛流行，但由于分离培养困难，临床菌株数量有限，分子流行病学资料较少， 药物敏感性数据也不充分。本实验旨在从周边不同地区猪场分离Mhp和Mhr临床菌株，扩充国内猪支原体菌株资源库，对所分离菌株进行基因型测定，开展分子流行病学分析，并检测临床分离株对常用抗生素药物的敏感性。具体研究内容和获得的主要结果如下： 第一，从江苏、安徽等地猪场采集有明显肺炎病变的肺脏病料进行支原体分离，对分离到的支原体进行 PCR鉴定，共分离出 Mhp 23株，Mhr 38株。对分离的菌株采用MLST方法进行基因型鉴定，结合采样来源和时间剔除重复菌株后，共获得 Mhp临床菌株 15株，Mhr临床菌株 17 株。将本研究获得的临床分离株和实验室前期分离得到的12株Mhp菌株和16株Mhr菌株一并进行MLST基因型分析。27株Mhp临床分离株共分成12种不同的ST型，辛普森多样性指数（SID）为0.818，具有明显的遗传多样性。12种ST型中4种为新鉴定的ST型，ST182型和ST61型为较为主要的ST型，分别占总菌数的33.3%和29.6%。对菌株的ST型进行聚类分析，共分为2个克隆群和10个独特型，未观察到国内分离株的分离地域与ST型之间存在明显相关性。33株Mhr临床分离株共分成22种不同的ST型，SID为0.968，具有明显的遗传多样性。22种ST型中20种为新鉴定的ST型，未观察到明显的优势ST型。对菌株的ST型进行聚类分析，共分为4个克隆群和9个独特型，未观察到国内分离株分离地域与ST型之间存在明显相关性。 第二、采用微量肉汤培养法测定临床常用的12种抗生素对Mhp和Mhr临床分离株的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC），得出各菌株抑菌浓度范围与MIC50、MIC90值。结果显示，土霉素对Mhp的MIC范围为 0.03-2 μg/mL，多西环素为 0.015-2 μg/mL，泰乐菌素为≤0.0075-8 μg/mL，泰万菌素为≤0.0075-2 μg/mL，林可霉素为 0.03-≥128 μg/mL，泰妙菌素为≤0.0075-0.125 μg/mL，庆大霉素为 1-≥128 μg/mL，安普霉素为 2-≥128 μg/mL，环丙沙星为≤0.0075-0.5 μg/mL，替米考星为0.06-≥128 μg/ml，恩诺沙星为 0.015-2 μg/mL，氟苯尼考为 0.125-4 μg/mL。泰万菌素的 MIC50 与 MIC90 最低，均≤0.0075 μg/mL，泰妙菌素的 MIC50 为 0.015 μg/mL，MIC90为 0.03 μg/mL。预测采用泰万菌素与泰妙菌素临床治疗 Mhp感染效果最好。土霉素对 Mhr的 MIC范围为 0.25-8 μg/mL，多西环素为 0.125-1 μg/mL，泰乐菌素为0.03-32 μg/mL，泰万菌素为≤0.0075-4 μg/mL，林可霉素为0.06-≥128 μg/mL，泰妙菌素为≤0.0075-0.125 μg/mL，庆大霉素为 1-16 μg/mL，安普霉素为 1-≥128 μg/mL，环丙沙星为 0.25-1 μg/mL，替米考星为 0.06-≥128 μg/mL，恩诺沙星为 0.5-4 μg/mL，氟苯尼考为 0.5-4 μg/mL。泰妙菌素的 MIC50为 0.03 μg/mL，MIC90为 0.125 μg/mL，Mhr 临床分离菌株对其最为敏感。此外，多西环素与环丙沙星的 MIC50与MIC90值也较低，也可考虑作为临床治疗 Mhr 感染用药。 本研究共分离获得 Mhp 临床菌株 15 株，Mhr 临床菌株 17 株，丰富了我国 Mhp和Mhr的菌株资源库。结合实验室以往分离株对江苏及周边地区Mhp和Mhr的分子流行病学进行了检测分析，发现Mhp和Mhr均具有明显的遗传多样性。药物敏感性测定结果提示 Mhp 对泰万菌素和泰妙菌素最为敏感，Mhr 对泰妙菌素最为敏感，其次为多西环素与环丙沙星，研究数据可为临床合理用药和防控提供指导。
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