摘要
目的:贞芪扶正颗粒卓越的补气养阴功效使得近年来在临床上针对各种气阴两虚患者表现出的免疫力低下等症状的治疗领域凸显出更大的临床价值,但其标准的修订工作却严重滞后.为提升产品的品质和标准,保障其安全性和有效性,本文从多个角度探讨其质量控制的可行性,力求在质量标准研究中"深入浅出",在充分尊重科学规律的前提下,提供切实可行的质量标准控制策略. 方法:本文建立了HPLC测定贞芪扶正颗粒中多成分同步测定方法,并对市售贞芪扶正颗粒(由女贞子、黄芪组成)的有糖型和无糖型制剂产品进行全面评估,以制定适宜的质量控制策略,为提升贞芪扶正颗粒质量控制标准服务.论文分别采用两个洗脱系统对贞芪扶正颗粒中6个有效成分(红景天苷、毛蕊异黄酮苷、特女贞苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、黄芪甲苷)进行测定.色谱系统Ⅰ:以甲醇和水为流动相,流速1.0mL·min-1,梯度洗脱,二极管阵列检测器检测,检测波长分别为224,250,275nm.色谱系统Ⅱ:以甲醇-水(80∶20)为流动相,流速1.0mL·min-1,蒸发光散射检测器检测,漂移管温度为75℃,载气流速1.5L·min-1,增益值为8. 本文对黄芪TLC供试品溶液的制备方法进行了完善,同时研究了黄芪对照药材的TLC法.重点对女贞子药味的特女贞苷对照品、女贞子对照药材薄层色谱及其供试品溶液的制备方法进行了研究. 指纹图谱(FP)是借用图谱整体信息,用于中药质量的整体评价,确保其内在质量的均一和稳定.本文建立的FP条件:以乙腈和水为流动相,流速为1.0mL·min-1,在波长220nm下进行梯度洗脱.经过测定69批次的成品,确定了15个共有峰.通过对照药材的对比归属了15个共有峰,其中峰1、2、3、4、6、7、8、11来源于女贞子药材,峰5、9、10、12、13、14、15来源于黄芪药材.并利用对照品指认法,确认了其中的7个共有峰,分别为峰1为羟基酪醇、峰2为红景天苷、峰3为酪醇、峰5为毛蕊异黄酮苷、峰6为特女贞苷、峰9为芒柄花苷、峰12为刺芒柄花素. 结果:对不同厂家的80批贞芪扶正颗粒进行了含量测定,并对质量特征进行统计学分析.结果表明6个主要成分在80批贞芪扶正颗粒中均可检出,但含量差异较大.单因素方差分析检验结果显示,在含糖型制剂中,厂家4与其他厂家之间具有显著性差异(plt;0.05);在无糖型制剂中,厂家3与其他厂家之间具有显著性差异(plt;0.05);从成分上来说,显著性差异更多的集中在来源于女贞子的特女贞苷、红景天苷两个成分(未列入制剂标准中)上. 在黄芪TLC供试品溶液制备中,对比了部颁方法、企业方法、新建方法等,新建方法制备的样品主斑点黄芪甲苷清晰,且其他斑点也相对丰富;同时以新建方法,对比了不同厂家、不同剂型的产品质量,结果表明不同厂家黄芪薄层色谱的主要斑点一致,不同剂型的黄芪薄层色谱主要斑点一致;通过建立的女贞子药味的薄层色谱方法鉴别得出,不同厂家女贞子薄层色谱的主要斑点一致,不同剂型女贞子薄层色谱主要斑点一致. 通过“中药指纹图谱相似度评价软件”首先形成了含糖和无糖型的重叠指纹图谱以及相应剂型的对照FP.又通过软件形成了各自厂家的对照FP,再通过不同厂家的对照FP对比,生成所有厂家之间的对照FP及其相似度值.通过不同厂家的相似度值区分了4个含糖厂家和5个无糖厂家的制剂. 通过SIMCA+P软件的分析,本文找到了不同厂家之间差异的主要成分.在分析含糖型不同厂家间FP时,PCA和PLS-DA两个模型都将含糖型的29批贞芪扶正颗粒分到了不同的4个区域,每个区域一个厂家,明显的区分了不同的4个厂家.通过VIPgt;1的值,PLS-DA模型指出了4个厂家质量不同的主要差异成分为峰6(特女贞苷)、4、5(毛蕊异黄酮苷)、8、11、2(红景天苷).再进一步结合峰的归属药材,峰4、6、8、11、2都属于女贞子药材,由此可知,4个厂家的差异主要集中在女贞子上.在分析无糖型FP时,PCA和PLS-DA两种模型的拟合能力值和预测能力值也都都大于0.5,表明模型建立成功,两个模型都将无糖的40批贞芪扶正颗粒分到了2个区域,一个区域为甘肃扶正药业,另一个区域为其他4个厂家.通过VIPgt;1的值,PLS-DA模型指出了这两类厂家质量差异的主要成分为峰4、2(红景天苷)、8、9、5.再进一步结合峰的归属药材,峰4、2、8都属于女贞子药材.即:无糖型质量差异也主要集中在女贞子上.因此,要全面保障产品的质量,必须增加女贞子的相应检查和定量. 结论:不同厂家贞芪扶正颗粒中,成分一致,但含量差异较大;质量的差异主要集中在女贞子上.
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