摘要
美国白蛾(HyphantriacuneaDrury)和微红梢斑螟(DioryctriarubellaHampson)都是我国重要林业害虫，寄主植物众多且分布范围广泛。美国白蛾以幼虫啃食寄主植物叶片为主，导致寄主植物死亡，微红梢斑螟为幼虫蛀食梢果，致寄主植物枝梢弯曲甚至死亡，它们均严重制约林业经济发展。从预防监测、分子检测及综合防治三方面着手，对加强检疫，实现林业害虫绿色防治意义重大。为高效、准确地检测监测两种重要林业害虫——美国白蛾及微红梢斑螟，本试验首先建立快速检测技术体系，根据NCBI数据库中的美国白蛾、微红梢斑螟及近缘种、近似种线粒体COⅠ基因片段信息以及昆虫样本COⅠ基因测序比对结果为模板，设计特异性引物，通过RPA扩增目标序列，结合CRISPR检测技术，构建RPA/CRISPR-Cas12a分子检测体系，应用等温扩增技术,提高了核酸扩增效率，通过优化等温扩增技术的操作流程，可进一步简化操作步骤，减少耗时，从而实现对害虫的现场快速、可视化、精准鉴定。其次研发长持效期引诱剂用于林间监测，筛选信息素高效缓释材料，研制高效诱芯，及时提供虫情信息，这对于及时防控、科学防治美国白蛾及微红梢斑螟具有重要意义。为美国白蛾和微红梢斑螟现场检测和高效监测提供理论和实践依据，有助于保护森林资源和生态环境的安全。 1.构建快速、高效、可视化的美国白蛾RPA/CRISPR-Cas12a分子检测体系，检测结果可通过荧光读取器和激发光源照射裸眼观察两种形式判读，结果表明:该检测体系灵敏度可达1.0×10-1ng/μL,较传统琼脂糖凝胶电泳检测方法提高了100倍，在30min内即可完成检测，对卵、幼虫及成虫各虫态均可实现快速、精准鉴定。 2.同样的方法，建立了微红梢斑螟RPA/CRISPR-Cas12a分子检测体系结果表明:该检测体系灵敏度可达1.0ng/μL,较传统琼脂糖凝胶电泳检测方法提高了10倍，在30min内即可完成检测。 3.在林间监测试验中，因天气原因导致美国白蛾发生量较少，诱蛾量较少，各缓释材料与进口商品化诱芯无显著差异性;微红梢斑螟引诱剂缓释材料为碳纳米管时，具有较好的诱蛾效果，其缓释时间可达50d,为后续害虫发生开展精准防治提供了依据。
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