摘要
目的：在不同国家中，中国的乳腺癌病例数最多，约占全球乳腺癌病例的18.4％，而乳腺癌发病的确切机制尚不清楚，并且与其他乳腺癌组相比，三阴性乳腺癌治疗是最具挑战性的，因此寻找降低耐药性以及化疗药物毒副作用和阐明药物靶向抗肿瘤分子机制对乳腺癌的治疗具有重要意义。 亮菌(Armillariella tabescens)是一种药食兼用真菌，亮菌多糖(Armillariella tabescens polysaccharides,ATPS)是亮菌中重要的天然有效成分，被证实在抗肿瘤、调节免疫、抗辐射等方面发挥关键作用，受到越来越多的关注。 癌症的转移和复发的重要原因之一是细胞发生了上皮细胞—间充质转化即EMT过程。EMT过程特征在于上皮细胞标志物(例如E-cadherin)的缺失，间充质细胞标志物(例如N-cadherin、Vimentin)的表达提升。这些标志物的表达变化导致细胞之间的粘附减少，使上皮细胞失去顶基细胞极性，重组细胞骨架，导致癌症发生转移。并且已经有研究表明ERK/MAPK信号通路通过调节基因表达在癌症进展和肿瘤转移中发挥重要作用，ERK抑制导致细胞无法诱导关键的EMT基因，并且关键上皮基因也会下调受到损害，这表明激活ERK信号传导对于驱动EMT的转录反应至关重要。 方法： 1.液体静置发酵的方式获得亮菌作为实验原料。 2.收集亮菌菌丝体设置单因素条件提取亮菌多糖，通过改变温度、料液比、提取温度与提取时间找到提取亮菌多糖的最佳条件。 3.选取三阴性乳腺癌细胞和人正常乳腺细胞进行毒性，选取合适的研究对象以及验证对人正常细胞是否有损伤。 4.随后通过MTT、细胞划痕和Transwell等实验检测亮菌多糖对三阴性乳腺癌细胞生长、运动以及迁移等功能的影响。 5.流式细胞仪检测亮菌多糖对细胞周期的影响。 6.通过Western blot检测亮菌多糖对EMT以及ERK相关蛋白的表达情况的影响。 7.使用抑制剂U0126与ERK激活剂tBHQ处理细胞后，通过MTT、细胞划痕和Transwell等实验检测ERK信号通路对TNBC细胞的功能的影响。 8.通过亮菌多糖联合紫杉醇处理细胞，通过MTT、细胞划痕和Transwell等体外实验以及荷瘤小鼠等体内实验检测亮菌多糖对紫杉醇的增效作用。 结果： 1.通过Design-Expert 8.06处理结果得出亮菌多糖的最佳提取工艺为提取温度93.40℃、料液比24.69∶1、提取时间4.71 h，此条件下得到多糖的最大提取得率为6.502％。考虑到现实因素，我们将提取温度设置为93℃,料液比为25∶1,提取时间为4h来提取亮菌多糖。 2.亮菌多糖可以抑制MDA-MB-231,Hs 578T以及MDA-MB-468细胞的增殖且对人正常乳腺细胞MCF-10A无影响，对三种乳腺癌细胞的半抑制浓度（IC50）分别为:485.2、657、1077 μg/mL。 3.亮菌多糖可以抑制TNBC细胞的生长、运动以及迁移。 4.亮菌多糖可以诱导TNBC细胞S期细胞周期停滞从而影响细胞增殖。 5.抑制剂U0126可以与亮菌多糖发挥协同作用，抑制MDA-MB-231细胞的生长、运动和迁移等功能。 6.亮菌多糖可以减弱ERK激活剂tBHQ对TNBC细胞的生长、运动和迁移功能的促进。 7.亮菌多糖可以增强紫杉醇的治疗效果，可以增强紫杉醇对TNBC细胞生长、运动和迁移能力的抑制作用。 结论： 亮菌多糖最佳的提取条件为，提取温度93℃,料液比25∶1,提取时间4h;亮菌多糖可以通过ERK信号通路抑制TNBC细胞的增殖和EMT进程，并且可以增强紫杉醇的治疗效果。
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