摘要
目的： 遭受早年不良经历者具有抑郁易感性，经历二次创伤后容易发生情绪情感障碍，引发抑郁症。本实验采用母婴分离模拟早年不良经历，束缚应激作为“二次打击”诱导抑郁症模型，从神经可塑性探究母婴分离“二次打击”抑郁小鼠的证候基础。 方法： 小鼠出生后5-14 d给予母婴分离8 h/d，离乳后分为母婴分离组（MS）、模型组（MS+RS）、温阳组（Wenyang）、解郁组（Xiaoyao）、温阳解郁组（XSF）及阳性药组（Fluoxetine），并以正常小鼠为对照组（NC）。NC、MS、MS+RS组小鼠以正常饲料喂养，Wenyang、Xiaoyao、XSF及Fluoxetine组小鼠分别给予二仙汤、逍遥散、温阳解郁方及盐酸氟西汀药混饲料，90日龄后除NC组连续给予21 d（3 h/d）的束缚应激。 采用糖水偏好、旷场实验评估小鼠抑郁样行为，社会交互实验评估小鼠的记忆能力。小鼠行为学检测结束后，第2 d上午腹腔注射1 %戊巴比妥钠进行麻醉，每组4只小鼠，灌注后取脑，于4 %多聚甲醛中固定备用；剩余小鼠直接取脑后置于-80℃冰箱备用。HPLC-ECD 法检测前额皮质和海马组织的单胺类神经递质含量，免疫组化法观察PSD95蛋白表达，实时荧光定量PCR法及Simple Western分别检测前额皮质、海马和杏仁核组织BDNF、TrkB、CREB、PSD95及SYN的mRNA和蛋白表达水平。 结果： 同NC组相比，MS+RS组小鼠糖水偏好指数显著降低（P＜0.01），社会交互的辨别比率显著升高（P＜0.01），中央区停留时间、中央及外周区运动路程和中央区穿越次数显著降低（P＜0.01，P＜0.05），外周区停留时间显著升高（P＜0.05）；与MS+RS组相比， Xiaoyao、XSF及Fluoxetine组糖水偏好指数显著上升（P＜0.05，P＜0.01），Xiaoyao与XSF组小鼠辨别比率显著降低（P＜0.01，P＜0.05），Wenyang和Xiaoyao组仅中央区运动路程及穿越次数显著增高（P＜0.05），XSF组中央及外周区运动路程增加（P＜0.01，P＜0.05）。 神经递质含量结果：同NC组比较，MS+RS组小鼠前额皮质组织5-HT含量显著降低（ P＜0.05 ）；同MS+RS组比较， XSF组前额皮质组织含量5-HT、5-HIAA显著升高（P＜0.05）。同NC组比较，MS+RS组海马组织5-HT、5-HIAA、DA及DOPAC含量显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；同MS+RS组比较，Wenyang、XSF组海马组织5-HT、5-HIAA、DA及DOPAC含量显著升高（P＜0.05，P＜0.01），Xiaoyao与Fluoxetine组5-HT、5-HIAA及DOPAC显著升高（P＜0.05，P＜0.01）。 同NC组比较，MS与MS+RS组小鼠前额皮质区PSD95蛋白表达显著降低（P＜0.05，P＜0.01），前额皮质组织PSD95、SYN、CREB mRNA和PSD95、SYN、BDNF、CREB蛋白均显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；同MS+RS组比较，Wenyang组前额皮质区PSD95蛋白显著升高（P＜0.05），PSD95 mRNA和BDNF、CREB显著升高（P＜0.05，P＜0.01）， Xiaoyao组PSD95、BDNF mRNA和CREB蛋白显著升高（P＜0.05，P＜0.01），XSF组PSD95、SYN、BDNF mRNA显著升高（P＜0.05，P＜0.01）。 同NC组比较，MS+RS组小鼠海马CA1、CA2及CA3区PSD95蛋白表达显著降低（P＜0.01，P＜0.05），海马组织PSD95、SYN、BDNF、TrkB、CREBmRNA均显著下降（P＜0.01，P＜0.05），PSD95、SYN、BDNF、TrkB蛋白显著降低（P＜0.01，P＜0.05）；同MS+RS组比较，Wenyang组CA1、CA3区PSD95蛋白表达显著升高（P＜0.01）， PSD95、SYN、BDNF、TrkB、CREB mRNA均显著升高（P＜0.01，P＜0.05），BDNF、TrkB、CREB蛋白均显著升高（P＜0.01，P＜0.05），Xiaoyao组CA1、CA3区PSD95蛋白表达显著升高（P＜0.01），PSD95、SYN、BDNF、TrkB、CREB mRNA均显著升高（P＜0.01，P＜0.05），TrkB蛋白显著升高（P＜0.05），XSF组CA1、CA2及CA3区PSD95 表达显著升高（P＜0.01，P＜0.05），XSF 组海马组织 PSD95、SYN、BDNF、TrkB、CREB mRNA和蛋白均显著升高（P＜0.01，P＜0.05）。 同NC组比较，MS+RS组小鼠杏仁核区PSD95蛋白呈下降趋势，SYN、CREB mRNA显著降低（P＜0.05），PSD95、BDNF蛋白显著降低（P＜0.01）；同MS+RS组比较，Wenyang组PSD95、SYN、CREB蛋白均显著升高（P＜0.01，P＜0.05），Xiaoyao与Fluoxetine组SYN mRNA和蛋白显著升高（P＜0.01，P＜0.05），XSF组SYN蛋白显著升高（P＜0.01）。 结论： （1）母婴分离二次打击可以诱导小鼠出现抑郁样行为，前额皮质及海马组织单胺类神经递质降低，造成抑郁症模型，且温阳、解郁及温阳解郁方对小鼠的抑郁样行为和单胺类神经递质均有较好的改善作用。 （2）母婴分离联合束缚应激可以引起小鼠神经可塑性降低，温阳及温阳解郁方对PSD95及SYN的上调效果更好，对神经可塑性的改善作用更为显著，依据以方测证原理，母婴分离二次打击小鼠的证候基础可能与阳虚肝郁有关，以阳虚证为主。 （3）温阳及温阳解郁方可能通过抑制HPA轴的过度激活，调节BDNF-TrkB-CREB信号通路起到改善小鼠神经可塑性的作用。依据以方测证，推测母婴分离二次打击小鼠阳虚肝郁证候的生物学基础可能与HPA轴过度激活，抑制BDNF信号通路有关。
NETL