摘要
目的： 探讨miR-145-5p在动脉粥样硬化发生发展过程中对其相关炎症反应和氧化应激过程的影响及其发挥作用的分子机制。 方法： 1. 使用多种生物信息学软件在线预测及分析miR-145-5p的靶点及结合位点。构建携带miR-145-5p下游靶mRNA TLR4-3，UTR结合位点的野生型质粒（TLR4-3， UTR-WT）和对结合位点碱基序列进行了突变的突变型质粒（TLR4-3，UTR-MUT），分别与miR-145-5p mimic及mimic NC共转染293T细胞。采用双荧光素酶报告实验检测miR-145-5p和TLR4-3，UTR的直接结合作用。 2. ox-LDL诱导单核细胞源性巨噬细胞，构建AS细胞模型，采用油红O染色对所得模型进行验证。采用qRT-PCR技术分析泡沫细胞模型中miR-145-5p、TLR4 mRNA的表达量；采用Western blot分析泡沫细胞模型中TLR4蛋白表达量的变化。 3. 采用脂质体瞬时转染技术在泡沫细胞内进行miR-145-5p的过表达和抑制。采用qRT-PCR、Western blot技术检测miR-145-5p下游靶基因TLR4 mRNA及蛋白表达的变化情况；同时使用酶联免疫吸附实验（ELISA）对各组细胞中炎性因子表达情况进行检测，包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）和白介素-6（IL-6）；使用生化相关试剂盒测定氧化应激的指标超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的表达量。 4. 统计学分析，实验所得数据采用SPSS 21和GraphPad 9.0进行统计学分析及作图，以P＜0.05为检验水准。 结果： 1. 多种靶基因预测软件分析认为TLR4是miR-145-5p与动脉粥样硬化相关的靶基因，后采用双荧光素酶报告实验进行验证，miR-145-5p mimic能够显著抑制含有TLR4-3，UTR-WT报告基因的荧光素酶活性。 2. 油红O染色及细胞内脂质颗粒含量分析结果显示ox-LDL诱导的泡沫细胞模型构建成功。 3. 在ox-LDL诱导的泡沫细胞模型中，miR-145-5p的表达量显著降低，同时发现TLR4 mRNA及蛋白质表达量均上调。 4. 体外细胞功能实验结果证明，在泡沫细胞中过表达miR-145-5p能够使TLR4的mRNA及蛋白质表达量明显降低；降低细胞上清液中炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）的表达，降低细胞内脂质氧化的产物MDA的表达，增加发挥抗氧化作用的SOD的表达。抑制miR-145-5p的表达则出现相反的现象，提示miR-145-5p能够通过抑制TLR4的表达，调控AS的炎症反应和氧化应激对AS发挥保护作用。 结论： 1. miR-145-5p与TLR4 mRNA的3，UTR具有靶向结合作用。 2. 在AS细胞模型中miR-145-5p及TLR4mRNA和蛋白表达量显著改变。 3. miR-145-5p能够通过靶向TLR4减少炎症因子分泌，减少脂质降解产物MDA的产生，增加抗氧化物SOD的表达，从而抑制AS的发生发展。
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