摘要
目的：氧化应激是心肌梗死（Myocardialinfarction，MI）后心肌细胞损伤的重要机制之一，心肌缺血、缺氧后局部组织活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS）增加，ROS直接氧化损伤胞内组分，并激活炎症反应加剧心肌细胞损伤，而抗氧化治疗能够有效改善心肌细胞损伤。依达拉奉是临床上常用于急性脑卒中后的抗氧化剂，但其注射剂型的给药方式、其他制剂的生物利用度低使得在临床使用上受限，而我们合作研发的口服制剂TTY01的能够有效解决生物利用度低的问题，且即将进入脑卒中的临床试验。因此，我们在小鼠MI模型中探讨口服制剂TTY01是否降低MI心肌细胞损伤、改善心功能，为临床MI的防治提供新的思路。 方法： 第一部分探究TTY01与依达拉奉注射剂相匹配的剂量 将24只SD大鼠被分成4组，第1组：动物单次静脉推注给药6mg/kg依达拉奉；第2组、第4组：动物分别单次灌胃给予20mg/kg、180mg/kg的TTY01；第3组：动物每天灌胃给予60mg/kg的TTY01，连续7天。4组动物均在给药前（0小时）和给药后0.033、0.0833、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时采集血浆样品；而第3组动物于第4~7天给药前（0小时）及第7天给药后0.033、0.0833、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时采集血浆样品，通过高效液相色谱-串联质谱（LC/MS）测定血浆样本中依达拉奉的浓度、代谢产物。 第二部分探讨依达拉奉口服制剂TTY01对心肌梗死的影响 使用6~8周龄健康雄性C57BL/6小鼠，随机分为假手术（Sham）组、心肌梗死（MI）组、心肌梗死后给予60mg/kg剂量TTY01（MI+TTY01）组，每组8只小鼠。Sham组和MI组术后给予等体积生理盐水灌胃，连续7天或28天，每天一次；MI+TTY01组术后给予TTY01溶液灌胃，连续7天或28天，每天一次。7天或28天后超声检测小鼠心功能；检测血清SOD活性、GSH-PX活性以及MDA水平；心脏TTC染色、Masson染色检测心肌纤维化程度；二氢乙锭（Dihydroethidium，DHE）进行ROS荧光染色检测心肌氧化应激水平；WesternBlot（WB）检测心肌组织中Akt信号通路改变。 结果： （1）SD大鼠单次静脉推注6mg/kg的依达拉奉后，依达拉奉的消除半衰期（T1/2）、时间-血浆浓度曲线下面积（AUC0-last）分别为5.18±3.82h、1690±291ng*h/ml。SD大鼠单次灌胃给予20mg/kg、60mg/kg和180mg/kg的TTY01后，药物活性成分依达拉奉的浓度达峰时间分别出现在给药后0.0830h、0.0830h和0.0663±0.0258h，AUC0-last分别为2290±1240ng*h/ml、7450±2940ng*h/ml和29800±12400ng*h/ml，药物的生物利用度分别为40.7%、44.1%和58.8%，结合生物利用度将TTY01的AUC0-last标准化后得出当剂量为60mg/kg时可达到与静脉注射依达拉奉相当的血药浓度。 （2）通过LC/MS检测2种给药方式的代谢产物，结果显示两种方式代谢产物相似，说明TTY01经首过效应后药物代谢途径未受影响；且在给药过程中，大鼠对TTY01耐受性良好，未出现异常临床表现。 （3）与Sham组相比，MI组左心室射血分数显著降低（P＜0.05），而MI+TTY01组左心室射血分数较MI组明显改善（P＜0.05）； （4）与Sham组相比，经Masson染色后MI组胶原容积分数明显增加（P＜0.05），而MI+TTY01组胶原容积分数较MI组明显减少（P＜0.05）； （5）与Sham组相比，MI组心肌组织内ROS荧光强度显著（integrateddensity,IntDen）增加（P＜0.05），而MI+TTY01组心肌组织内ROS荧光强度较MI组明显减少（P＜0.05）； （6）与Sham组相比，MI组小鼠血清中SOD活性、GSH-PX活性明显降低，MDA水平明显升高（P＜0.05）。较MI组，MI+TTY01组小鼠血清中SOD活性、GSH-PX活性显著提升，有效降低血清中MDA水平（P＜0.05）； （8）与Sham组相比，MI组磷酸化Akt水平降低（P＜0.05），MI+TTY01组磷酸化Akt水平较MI组明显升高（P＜0.05）。 结论：（1）药代动力学实验表明，60mg/kg的TTY01能够达到与依达拉奉注射剂相当的血药浓度，在该剂量下实验动物耐受性良好，且TTY01经首过效应后药物代谢途径未受影响。（2）TTY01作为依达拉奉的口服制剂，通过上调心肌组织Akt磷酸化水平、降低氧化应激，从而改善心肌梗死后小鼠心功能、心肌纤维化。
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