摘要
鸡群免疫力低下导致感染性疾病多发是阻碍我国鸡健康养殖业高质量发展的主要问题。近年研究发现，天然免疫细胞在初次刺激后（不依赖T、B淋巴细胞）可产生免疫记忆，对异源或同源再刺激产生更快更强的反应，即“训练免疫”。该理论为感染性疾病的防治提供了新的研究视角。黄芪多糖（APS）在临床中常单独或与疫苗配合使用，用于预防雏鸡感染性疾病的发生，是免疫调节类产品中的优势产品。然而，该产品在实际使用中存在一定的盲目性，如何合理、科学的使用缺乏数据和技术支撑。因此，本论文拟通过评价不同剂量APS对鸡巨噬细胞HD11的初始刺激作用及分子机制，建立适量APS体外诱导HD11细胞形成训练免疫的技术，评价APS通过训练免疫增强HD11细胞停药后期的免疫监视和防御能力的作用；通过初步建立APS饲喂肉鸡（体内训练单核细胞形成训练免疫）—停药后正常饲养—LPS再刺激的评价模式，探讨APS对肉鸡的免疫增强作用和训练免疫作用，为APS在鸡健康养殖中的科学应用研究提供一定启发与参考。 1.APS对HD11细胞的初始刺激作用。采用Griess、qRT-PCR及WB方法，检测APS初始刺激HD11中NO、M1/M2型极化分子、细胞因子、TLR2/4及其下游分子表达的变化。结果发现：1）50、100和200μg/mL APS均显著上调iNOS、MHCⅡ、PTGS2、IL-8和IL-10的mRNA表达，显著下调CD206和TLR2的mRNA表达；100、200μg/mL APS显著上调NO的表达。2）50μg/mL APS显著上调MyD88、ERK和AKT的表达，显著下调P-ERK的表达；100μg/mL APS显著下调TLR4mRNA表达；显著上调MyD88、ERK、PI3K和AKT的表达。3）200μg/mL APS显著上调IL-1β、IL-6的mRNA表达，显著下调TLR4mRNA；显著上调NF-κB p65mRNA、ERK、PI3K和AKT的表达。 2.APS对HD11细胞的训练免疫作用。分别分为四个处理组：C-C（未训练+未刺激）、C-L（未训练+LPS再刺激）、A-C（训练+未刺激）和A-L（训练+LPS再刺激），采用Griess、qRT-PCR及WB方法，检测各组细胞中NO、M1型极化分子、细胞因子、TLR2/4及下游分子表达的影响。结果发现：1）依据NO检测结果，筛选出APS训练HD11的工作浓度为50μg/mL。2）与C-L组相比，A-L组中iNOS、MHCⅡ、PTGS2、TNF-α、IL-6、IL-10及NF-κB p65的mRNA表达显著上调，IL-1β、IL-8、TLR2的mRNA表达显著下调。3）APS训练HD1112h后，HIF-1αmRNA表达显著上调，但ERK mRNA表达显著下调；H3K4me3表达显著上调，而H3K27me3、H3K9ac和H3K4me1表达显著下调；与C-L组相比，A-L组mTOR、HIF-1α的mRNA显著上调，ERK mRNA表达显著下调。 3.APS对肉鸡的免疫增强作用及对单核细胞的训练免疫作用。在1～7日龄肉鸡日粮中分别添加0.0%（空白组）、0.05%（APSL组）、0.1%（APSH组）的APS；在7、14、21日龄检测ADG、ADF及免疫器官指数；21～23日龄腹腔注射LPS/生理盐水，设置C-C、C-L、APSL-C、APSL-L、APSH-C和APSH-L组，测定24日龄时鸡单核细胞中细胞因子、极化分子的mRNA表达。结果发现：1）0.1%APS可显著提高ADG，显著降低F/G，显著提高7～14日龄的胸腺指数，提升肉鸡试验全期生长性能。2）与空白组相比，APS能提高NDV-Ab效价，其中0.1%APS效果更佳。3）与C-L组相比，APSL-L和APSH-L可显著促进IL-6和IL-10的mRNA表达，显著抑制IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达。4）与C-L组相比，APSL-L和APSH-L显著上调iNOS、PTGS-2的mRNA表达。 综上所述，APS可诱导HD11细胞M1型极化，促进多种细胞因子表达，该作用与TLR2/4相关信号通路相关；50μg/mL APS可诱导HD11细胞发生组蛋白修饰并形成训练免疫，对LPS再刺激产生更强的免疫应答反应，该作用可能与TLR2-MyD88-HIF-1α/ERK信号通路相关；APS可降低雏鸡F/G，促进胸腺发育，增强疫苗抗体水平，提高鸡只后期对LPS刺激的防御能力。
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