摘要
尽管综合治疗的进展显著改善了乳腺癌的预后，但乳腺癌的复发转移仍是亟待解决的临床难题。课题组前期研究证实微波消融（Microwave ablation， MWA）作为一种局部微创热疗技术，在乳腺良性肿瘤的治疗上是安全可行的，但其在乳腺癌的临床治疗上还处于初步探索阶段。不仅如此，我们还证实MWA能够诱导抗肿瘤免疫应答。NK细胞是机体抗肿瘤的第一道防线，但其在MWA治疗乳腺癌诱导的抗肿瘤免疫应答中的作用机制尚不明确。 目的：本研究旨在通过动物实验和临床研究，系统性评估 MWA 治疗乳腺癌的疗效，深入探讨微波消融治疗乳腺癌诱导的NK细胞抗肿瘤免疫机制。 方法：构建Balb/c小鼠4T1乳腺癌模型和EMT-6乳腺癌模型，分别接受手术治疗、MWA 治疗或不治疗。分析各组小鼠的生存时间和肺转移情况。采集各组小鼠治疗后第7天和第14天的外周血、脾脏以及原发灶肿瘤组织，通过流式细胞术、酶联免疫吸附试验以及免疫耗竭实验等方法，分析各组小鼠治疗后免疫细胞的数量比例、功能状态和细胞因子的表达水平。本研究入组35例早期乳腺癌患者行 MWA 治疗，通过病理学检查或影像学随访，明确 MWA 治疗早期乳腺癌患者的局部疗效。为了进一步研究 MWA 治疗早期乳腺癌患者诱导的全身抗肿瘤免疫反应，本研究另外纳入14例接受标准手术治疗的早期乳腺癌患者作为对照组。采集所有患者治疗前后的外周血，通过酶联免疫吸附试验，分析患者血浆中细胞因子水平的变化情况。运用流式细胞术，分析患者 MWA 治疗后外周血中免疫细胞数量比例及功能状态的变化情况。 结果：通过小鼠乳腺癌模型，我们发现 MWA 治疗小鼠乳腺癌原发灶可以延长小鼠的生存时间、抑制远处肺转移的进展。同对照组和手术治疗组小鼠相比， MWA治疗后小鼠脾脏及外周血中活化的NK细胞的数量更多，成熟且具有杀伤功能的NK细胞比例更高，NK细胞杀伤肿瘤的能力更强。同时，MWA组小鼠治疗后血浆中具有激活 NK 细胞以及杀伤肿瘤功能的细胞因子浓度显著高于对照组和手术治疗组。小鼠体内耗竭实验表明，MWA 治疗小鼠乳腺癌原发灶依赖 NK 细胞发挥的抗肿瘤免疫效应来抑制远处肺转移进展、延长小鼠生存时间。我们通过小鼠体内体外实验，发现 MWA 治疗能够诱导原发灶内巨噬细胞浸润增多，并促使其分泌大量的细胞因子 IL-15 进入外周血循环中，从而进一步激活 NK 细胞抗肿瘤免疫应答。依据前期基础，我们入组合适的早期乳腺癌患者进行临床研究。在接受 MWA治疗的 35例早期乳腺癌患者中，有 32例乳腺癌患者达到完全消融（32/35，完全消融率 91.4%），所有患者均未出现明显的不良反应。与接受标准手术治疗的早期乳腺癌患者相比，MWA 治疗后患者外周血中活化的NK细胞比例增多，血浆中IL-15浓度提高，进一步证实MWA治疗乳腺癌原发灶能够激活 NK 细胞免疫应答。然而，MWA 治疗后患者外周血中CD8+T细胞的比例变化不明显。部分 HER-2阳性和三阴性乳腺癌患者在 MWA治疗后，外周血中的 ICOS+CD4+T细胞比例和细胞因子 IFN-γ浓度升高，提示MWA可以增强部分乳腺癌患者的CD4+T细胞免疫反应。 结论：MWA 不仅是一种安全可行的早期乳腺癌局部治疗方式，还能够诱导巨噬细胞产生 IL-15 激活 NK 细胞抗肿瘤免疫应答，从而抑制乳腺癌的转移。同时，MWA还可以激活部分乳腺癌患者 CD4+T细胞免疫反应。因此，寻找合适的免疫治疗策略来增强微波消融诱导的抗肿瘤疗效，在早期乳腺癌的精准微创治疗中显得尤为重要。
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