摘要
研究背景： 目前，肺癌是导致肿瘤相关死亡的首要原因，肺腺癌是肺癌最常见的类型。由于缺乏高效的早期诊断标志物，大部分肺腺癌患者确诊时已是晚期，是造成肺癌患者预后差的主要原因之一。早发现、早治疗可显著提高肺癌患者生存时间。因此，寻找新型高效的肺癌诊断标志物，将有助于早期肺癌的检出和疗效的实时监控。 研究表明，外泌体环状RNAs（circRNAs）具有外泌体功能传递和circRNA转录调控的双重特性，具备稳定性高、表达特异、易于检测等特点。已有报道，在许多疾病中发现具有调节功能的circRNAs，其参与肿瘤、心血管系统、循环系统等疾病的发生发展，有望成为潜在的临床生物标志物和治疗靶点。课题组前期构建肺腺癌血清外泌体circRNAs差异表达谱，本研究应用实时荧光定量PCR（QuantitativeReal-timePolymeraseChainReaction，qRT-PCR）技术对表达谱中的circRNAs进行初筛，选出候选circRNAs（hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492和hsa_circ_0000896）。进一步验证这三个circRNAs在肺腺癌患者血清与血清外泌体中的表达情况，研究circRNAs表达水平与临床参数相关性；分析肺腺癌患者手术前后circRNAs的差异表达，评估其诊断效能，旨在发现有诊断和治疗价值的肺腺癌生物学标志物。 方法： 1.分离提取血清和血清外泌体RNA，逆转录为cDNA，并应用qRT-PCR技术检测hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896分子表达水平。2.电化学发光技术用于检测血清癌胚抗原（CarcinoembryonicAntigen，CEA）、鳞状上皮细胞癌抗原（SquamouscellCarcinomaAntigen，SCC）等临床常用肿瘤标志物的表达量。 3.受试者工作特征曲线（ReceiverOperatingCharacteristiccurves，ROC）分析circRNAs分子对肺腺癌的诊断效能。 4.收集并记录肺腺癌患者病例信息，统计分析血清和血清外泌体circRNAs与临床参数的相关性。 结果： 1.qRT-PCR结果显示：血清外泌体circRNAs（hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896）在肺腺癌病例组表达水平显著高于健康对照组。诊断效能显示：hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的ROC曲线下面积AUC分别为0.783、0.783、0.799，血清CEA的AUC为0.592。当将血清CEA和外泌体三个circRNAs四者联合诊断时AUC值为0.805。血清外泌体circRNAs表达水平与临床参数相关性结果显示：hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492在肺腺癌患者中表达与T分期、N分期、M分期、TNM分期显著相关，hsa_circ_0000896与年龄、TNM分期相关。 2.肺腺癌患者术后血清外泌体三个circRNAs表达水平与术前相比显著下调。ROC曲线分析肺腺癌患者手术组血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的诊断价值，其AUC分别为0.929、0.829、0.880。 3.血清circRNAs在肺腺癌病例组表达水平相对于健康对照组显著上调，hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的AUC分别为0.659、0.724、0.730。然而，血清三个circRNAs与临床参数无相关性。 4.肺腺癌患者术后血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达量与术前相比显著下调。ROC曲线分析手术组肺腺癌患者血清circRNAs的诊断价值，hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的AUC分别为0.860、0.815、0.894。 结论：血清和血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896在肺腺癌患者中表达量显著上调，均具有良好的诊断效能。血清外泌体三个circRNAs在肺腺癌患者中表达水平与临床分期显著相关，血清circRNAs与临床参数无相关性。血清和血清外泌体三个circRNAs在肺腺癌患者术后的表达水平显著下调。因此，hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896有望成为肺腺癌新的分子诊断标志物，可能在肺腺癌发生发展中起着重要作用。
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