摘要
急性髓系白血病（AML）是一种血液系统恶性肿瘤，主要表现为骨髓与外周血中原始髓系细胞的异常分化和增殖，当前治疗手段仍以化疗为主，但患者存在生存率低、预后差等问题。近年来，小分子靶向药物的兴起为AML患者带来了曙光。临床前及临床研究显示，布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）和FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）在AML细胞的增殖、存活和迁移中发挥重要作用，且联合使用两种激酶抑制剂具有协同抗肿瘤作用。因此，开发 BTK/FLT3 双靶点抑制剂具有可行性，且对AML的治疗有重要意义。 鉴于BTK抑制剂spebrutinib对FLT3具有中等程度的抑制活性，我们通过分子对接研究了其与 BTK或 FLT3靶点相互作用模式，以指导结构优化。根据spebrutinib与BTK或FLT3的结合模式，我们保留了spebrutinib的活性药效团氨基嘧啶母核，一方面使用不同含 N杂环取代醚链结构，以增加化合物与两个激酶“后口袋”的相互作用；另一方面使用不同的氢键受体/供体取代丙烯酰胺弹头，来增加化合物与靶蛋白氨基酸残基的氢键相互作用，从而增加目标化合物与BTK和FLT3的结合能力，最终设计并合成了29个新型BTK/FLT3双靶点抑制剂：酯基化合物13a-l和异羟肟酸化合物14a-q。 初步抑酶试验结果显示：大部分化合物对 BTK或 FLT3显示出强效的抑制作用，特别是化合物14d、14g、14j和14m对BTK、FLT3和FLT3D835Y突变体靶点均有较好的抑制活性，IC50值在纳摩尔水平。接着，我们评估了代表性双靶点化合物对 5 种白血病细胞的抗增殖活性，14d、14g、14j 和 14m 的 IC50值在 0.29-950 nM，显著优于阳性药（spebrutinib 和 sorafenib），特别是 14m 其对所有测细胞的抗增殖活性优于阳性药（spebrutinib）101-1045倍。随后，我们利用MV-4-11细胞对14m进行了初步的作用机制研究，结果显示，14m可剂量依赖性地诱导自噬和细胞凋亡。最后，我们在 MV-4-11 异种移植肿瘤小鼠模型中评估了 14m 的抗肿瘤活性，腹腔注射 20 mg/kg 的 14m 可有效地抑制 MV-4-11肿瘤生长，肿瘤抑制率达95.68%，且没有明显毒性反应。 综上所述，我们开发了一系列新型氨基嘧啶类 BTK/FLT3 双靶点抑制剂，尤其是化合物 14m在体内外生物学评价中都表现出优异的抗 AML活性，是良好的新药研发先导化合物。
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