摘要
目的:分析7例IQSEC2基因突变患儿临床表型和基因型，回顾既往已发表文献，探讨IQSEC2基因突变患儿临床表型与基因型之间的关系，扩充IQSEC2基因突变数据库，为临床诊断、治疗及预后提供相应依据。 方法:1、病例收集:收集2018年5月至2022年9月在广西医科大学第一附属医院就诊的7例IQSEC2基因突变患儿的临床资料，在家属签署知情同意书后采集患儿及父母的外周血外送至具有资质的基因检测公司提取DNA进行家系基因检测，对IQSEC2基因型和临床表型进行回顾性分析。 2、功能验证实验:对其中一个IQSEC2A836V突变位点进行GGA-pulldown实验，探讨该突变对蛋白质表达的影响。 3、生物信息学分析:使用相关预测软件对3例IQSEC2错义突变患儿的突变位点在致病性、保守性及稳定性进行生物信息学分析。 4、文献回顾:在PubMed，Embase、OMIM、中国知网、万方数据库中检索关键词“IQSEC2”、“IQSEC2gene”及其等同中文意思的文献，对符合要求的文献进行临床数据提取和分析。 结果:1、7例患儿中男性6例，女性1例。5例患儿为新发突变，2例患儿突变来源于母亲，其中错义突变3例(c.2507C＞T/p.Ala836Val、c.3836C＞T/p.Pro1279Leu、c.2983C＞T/p.Arg995Trp)、移码突变2例(c.4419dup/p.Ser1474GlnfsTer133、c.3853_3860del/p.Pro1285Alafs*99)、内含子突变1例(c.1967+1G＞C)、拷贝数变异(copynumbervariations,CNVs)1例(Xp11.22(chrX:53267287-53268486)*1)。7例患儿癫痫(epilepsy,EP)起病年龄为4月龄至4岁2月。EP发作类型多样，包括痉挛发作(epilepsyspasms,ES)5例，不典型失神发作(atypicalabsenceseizure，AAbS)、强直发作(tonicseizure，TS)各3例，局灶性发作(focalseizures,FS)、失张力发作(atonicseizure,AS)各2例。除1例患儿发育正常外，其余6例起病前均伴有不同程度的发育迟缓(developmentaldelay,DD),其他临床表现有小头畸形、孤独症谱系障碍(autismspectrumdisorder,ASD)、流涎、肌张力减低等。头颅磁共振(magneticresonanceimaging，MRI)提示异常5例，正常2例。7例患儿中，4例在使用一种或多种抗癫痫发作药物(antisei-zuremedications,ASMs)后发作控制。 2、功能验证实验结果:Input组GFP标签抗体结果显示，融合蛋白GFP-ARF6(Total-ARF6)表达正常、分子量大小正确，且表达量基本一致;flag标签抗体结果显示，融合蛋白flag-IQSEC2表达正常、分子量大小正确，且表达量基本一致。Pull-down组中GST抗体结果显示，GST-GGA3正常表达且挂珠量均一;GFP抗体结果显示，与IQSEC2野生型(wt)相比，IQSEC2mut1:c.2507C＞T(p.Ala836Val)、mut2:c.2545G＞A(p.Glu849Lys)中ARF6-GTP的表达量显著降低。 3、生物信息学分析结果:在致病性方面，3个错义突变位点在SIFT及MutationTaster中均被预测为致病性变异，而在CADD及Polyphen2中则被预测为可能致病;在稳定性方面，iStable及MUpro均提示3个错义突变位点会降低IQSEC2蛋白的稳定性，而DUET和SDM在两个突变位点(p.Ala836Val、p.Pro1279Leu)的分析中出现了相反的结果;在保守性方面，PhyloP及PhastCons均提示3个错义突变位点具有高度保守性，Uniprot提示p.Ala836Val位点在不同物种间亦具有高度保守性;在突变氨基酸侧链性质变化方面，VarSite分析显示，p.Arg995Trp变异前后氨基酸的疏水性发生显著变化，其侧链氨基酸残基由原先的亲水性变为疏水性，而其余两种错义突变位点变化不大。 4、文献回顾:共收集90篇相关文献(85篇英文文献，5篇中文文献)，提取并总结了214例患者(123例男性，91例女性)相关临床表型及基因型。这214例患者中共计有10种IQSEC2基因突变类型，其中错义突变104例，移码突变46例，无义突变39例，内含子突变9例，剪切突变6例，缺失突变4例，拷贝数变异3例，插入缺失突变、染色体易位及基因融合各1例。IQSEC2基因突变患者有38.3％的基因突变位点主要集中在Sec7结构域，临床表型以智力障碍(intellectualdisability,ID)/DD、EP、ASD为主。大部分EP患者使用多种ASMs仍未控制。 结论:1、突变型IQSEC2(c.2507C＞T,p.Ala836Val)与野生型IQSEC2相比，ARF6-GTP的表达显著降低。 2、突变型IQSEC2(c.2507C＞T,p.Ala836Val)与野生型IQSEC2相比，催化ARF6上GDP-GTP的转换效率降低。 3、IQSEC2致病变异是导致不同程度ID/DD、EP的一个重要原因，且男性临床表型相较于女性更重。
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