摘要
克氏原螯虾（Procambarusclarkii）属于甲壳纲，是一类重要的水产养殖物种。白斑综合征病毒（Whitespotsyndromevirus,WSSV）是一种双链DNA病毒，其具有传染性强、传播范围广和死亡率高等特点，严重危害虾蟹养殖业的发展。与哺乳动物不同，甲壳动物血淋巴中含有少量微生物。在病原感染时，极易导致体内菌群失衡，引起继发感染，但是继发感染的机制还不清楚。核呼吸因子1（Nuclearrespiratoryfactor1，NRF1）是维持调节线粒体稳态的转录因子，在RNA代谢、剪接、蛋白质翻译、泛素介导的蛋白质降解、DNA损伤修复和细胞凋亡等生物过程中起着关键作用，但其参与抗病毒免疫的研究较少。 本研究在克氏原螯虾中鉴定到一个NRF1基因，分析发现其具有一个Nrf1_DNA-bind结构域。NRF1在被检测的各组织中均有分布，WSSV感染克氏原螯虾12h、24h和48h时其表达水平增加，感染72h时其表达水平降低。体内干扰或抗体封闭NRF1之后，病毒复制水平增加，说明NRF1抑制病毒复制。本课题通过检测凋亡相关基因caspase3的表达水平以及使用凋亡试剂盒检测血细胞凋亡情况，发现干扰或抗体封闭NRF1之后，caspase3的表达水平下降，血细胞凋亡率降低。病原感染宿主后，宿主细胞会通过某种方式将病原微生物内吞，进而诱导细胞凋亡等过程抵御病原微生物的感染。许多生命过程都会伴随着活性氧（Reactiveoxygenspecies，ROS）的产生，适量的ROS对病原微生物有杀灭作用。进一步分析发现干扰或抗体封闭NRF1之后，吞噬相关基因dynamin和Rab7的表达水平下降，血细胞对WSSV的吞噬减少。ROS生成相关基因Duox2表达水平降低，ROS生成减少。利用干冰建立缺氧模型，发现NRF1、caspase3、dynamin、Rab7和Duox2转录水平在缺氧条件下均降低。进一步研究发现，WSSV感染72h后，克氏原螯虾血淋巴菌群失衡，氧血蓝蛋白含量降低，caspase3、dynamin、Rab7和Duox2表达水平降低，导致免疫稳态失衡。 综上所述，WSSV感染诱导NRF1高表达。NRF1通过上调dynamin、Rab7、caspase3和Duox2的表达水平，介导细胞吞噬和凋亡以及ROS的产生，抑制WSSV感染。但随着WSSV持续感染，引起继发感染，血淋巴菌群稳态失衡，导致克氏原螯虾体内缺氧。缺氧造成体内免疫分子表达水平下降，引起免疫稳态失衡，最终导致克氏原螯虾的死亡。本研究阐明了NRF1参与抗病毒免疫的机制以及WSSV感染引起继发感染，进而导致克氏原螯虾死亡的机制。本课题增补了先天免疫知识体系，并为白斑病的防治提供有效的理论依据。
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