摘要
目的和意义:基于网络药理学探索银杏叶治疗抑郁症的关键化合物、核心靶点及潜在作用机制;探讨银杏叶提取物对利血平致大鼠抑郁样行为的改善作用及机制，为临床应用银杏叶提取物治疗抑郁症提供参考依据。 方法: （1）在中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP平台），筛选条件设定为:口服生物利用度（OB）≥30％和类药性（DL）≥0.18,筛选出银杏叶的活性成分，并检索活性成分的靶点。通过Uniprot数据库将相关靶点蛋白转换为标准基因名。以“depression”作为疾病名在GeneCards和DisGeNET数据库收集抑郁症相关疾病靶点。将银杏叶作用的靶点基因和抑郁症相关靶点输入VENNY2.1取交集，得到银杏叶抗抑郁的潜在靶点。在String数据库中对蛋白质之间的相互作用进行分析，使用Cytoscape-v3.9.2构建活性成分-靶点网络图以及蛋白互作网络（PPI网络），得到银杏叶治疗抑郁症的关键活性成分及核心靶点;交集靶点通过DAVID平台进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析，预测银杏叶治疗抑郁症的潜在作用机制。 （2）将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、银杏叶提取物低、高剂量组及氟西汀组，每组8只。除正常组外，其他组别皮下注射小剂量利血平建立抑郁样行为大鼠模型。灌胃给予相应药物4周后，通过旷场实验测定大鼠直立次数及跨格子数，蔗糖水消耗试验计算大鼠糖水偏爱度，强迫游泳实验测定不动潜伏期和漂浮不动时间。通过试剂盒检测大鼠血清白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平及脑组织5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。苏木素—伊红（HE）染色法观察大鼠海马CA1区和CA4区神经元细胞形态。 结果: （1）从银杏叶活性成分与交集靶点相互作用网络图可知，银杏叶治疗抑郁症的可能关键成分为槲皮素（Quercetin）、山奈酚（Kaempferol）、木犀草素（Luteolin）、异鼠李素（Isorhamnetin）。从银杏叶治疗抑郁症的PPI网络图发现，银杏叶主要调控AKT1、TP53、TNF、IL6、VEGFA、CASP3、HIF1A、ESRI、MYC、IL1B等靶蛋白来达到抗抑郁作用。根据GO功能富集分析结果可知，银杏叶治疗抑郁症的关键靶点涉及的生物学过程主要有:基因表达的正向调控（positiveregulationofgeneexpression）、凋亡过程的负调控（negativeregulationofapoptoticprocess）、对外源刺激的反应（responsetoxenobioticstimulus）等;主要细胞组分在于:细胞外空间（extracellularspace）、胞质（cytosol）、核浆（nucleoplasm）等;涉及的分子功能有:酶结合（enzymebinding）、相同蛋白结合（identicalproteinbinding）、蛋白结合（proteinbinding）、蛋白质同源二聚化活性（proteinhomodimerizationactivity）等。KEGG通路富集分析结果显示，银杏叶治疗抑郁症的靶点主要通过调控癌症通路（Pathwaysincancer）、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路（AGE-RAGEsignalingpathwayindiabeticcomplications）、脂质与动脉粥样硬化（Lipidandatherosclerosis）、前列腺癌（Prostatecancer）、流体剪切应力和动脉粥样硬化（Fluidshearstressandatherosclerosis）等通路达到抗抑郁作用。该研究体现了银杏叶具有多成分、多靶点、多途径的特点，可为下阶段研究银杏叶提取物对利血平致大鼠抑郁样行为的改善作用及机制提供参考。 （2）与正常组比较，模型组大鼠体重显著降低（P＜0.05）,直立次数及跨格子数明显降低（P＜0.05），糖水消耗比例率显著减少（P＜0.05）,漂浮不动时间显著减少（P＜0.05），海马组织NE、DA、SOD水平显著降低（P＜0.05）,海马组织MDA、血清IL-6、TNF-α水平均显著升高（P＜0.05）,海马组织呈现弥散性损伤，大量神经细胞变性坏死，形态不规则，出现明显病理性改变。与模型组比较，银杏叶提取物低、高剂量组大鼠体重无明显改变，直立次数、跨格子数、糖水消耗比例率、潜伏不定期无显著性差异（P＞0.05）,漂浮不动时间显著减少（P＜0.05），海马组织NE、DA水平均显著升高（P＜0.05），TNF-α水平显著降低（P＜0.05）;银杏叶提取物高剂量组大鼠血清IL-6、海马组织MDA水平显著降低（P＜0.05），海马组织5-HT含量、SOD活性显著升高（P＜0.05）;银杏叶提取物低、高剂量组及氟西汀组大鼠海马组织病理变化有所改善，且银杏叶提取物高剂量组及氟西汀组大鼠海马组织病理改善较为明显。 结论: （1）银杏叶可能通过槲皮素、山奈酚、木犀草素、异鼠李素等关键成分，作用于AKT1、TNF、IL6、IL1B等相关靶点，经AGE-RAGE等信号通路，参与炎症、氧化等活动，从而发挥抗抑郁作用。 （2）银杏叶提取物能够改善利血平致大鼠抑郁行为，其机制可能与增加抑郁大鼠脑内单胺类神经递质5-HT、NE、DA含量，增加SOD活性，降低MDA、IL-6、TNF-α含量，改善脑部海马CA1和CA4区神经元细胞损伤有关。
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