摘要
研究背景 三阴性乳腺癌(TNBC)是乳腺癌中一类特殊的亚型，约占所有乳腺癌的15％-20％,具有复发、转移和死亡风险高的特点，对传统的内分泌治疗和HER2靶向治疗效果不佳，预后差。TNBC可根据分子分型分为四种亚型，其中管腔雄激素受体亚型(LAR)特征为雄激素受体(AR)信号通路活化，但抗雄激素治疗在临床获益并不理想。因此，亟须探索TNBC对靶向AR的治疗药物耐受的机制并在此基础上寻找新的治疗靶点。 N6甲基腺苷转移酶1(N6AMT1)是一种甲基转移酶，N6AMT1被发现在乳腺癌和三阴性乳腺癌组织中表达下降，且与奥拉帕尼耐药相关，但N6AMT1与TNBC预后及AR靶向治疗耐药的关系尚不清楚。非编码RNA异常表达与多种肿瘤发展相关。其中，诸多circRNAs已被证实参与TNBC的增殖、侵袭和治疗应答调控。基于竞争性内源性RNA(ceRNA)网络构建的整合分析已被充分应用于诠释与目标基因存在相互作用关系的RNA网络及潜在调控机制。 本研究首先基于公共数据库转录组数据探讨N6AMT1在TNBC中的差异表达及预后价值，探究其在TNBC发生发展和药物耐药中的角色和调控机制。同时，还鉴定出TNBC中的N6AMT1相关的RNA调控网络，为开发新型治疗策略提供思路。 研究目的 1.基于公共数据库挖掘探索N6AMT1在TNBC中的表达及预后关联。 2.基于N6AMT1敲减的TNBC细胞株，探索N6AMT1在LAR型TNBC内分泌治疗抵抗中的作用及潜在分子机制。 材料与方法 1.基于TCGA数据库及GEO数据库TNBC转录组测序数据集，利用R软件包分析N6AMT1在TNBC与非癌组织样本中的表达差异。使用KMPlotter在线工具进行生存分析以探索N6AMT1表达水平与患者预后之间的关联。 2.构建N6AMT1稳定敲减的TNBC细胞株MDA-MB-453，在mRNA测序的基础上，采用edgeR包处理原始测序数据，进行差异基因表达分析。利用Omicshare平台对差异基因进行KEGG和GO富集分析。通过Spearman相关性分析，验证在线数据库中TNBC数据集里N6AMT1与这些关键基因之间的相关性。并在GDSC数据库探讨N6AMT1下调后，TNBC患者对AR抑制剂比卡鲁胺的敏感性。 3.借助TargetScan网站预测可能与N6AMT1相互作用的miRNA,并结合KMPlotter分析这些miRNA在TNBC患者中的表达与患者生存的相关性。通过circBank数据库预测了可能调控这些关键miRNA的circRNA,并对它们之间的相关性进行了分析。 研究结果 1.N6AMT1在TNBC中的表达水平显著低于相邻非肿瘤组织(p=9.7e-15),N6AMT1低表达与TNBC患者的不良预后紧密相关(p=0.032)。 2.N6AMT1下调影响了诸如药物代谢、FoxO信号通路等多种功能通路，尤其是内分泌治疗抵抗。进一步研究发现DLL4基因在这些变化中起着核心作用，经在线数据库验证，N6AMT1与DLL4之间存在正相关关系。此外，DLL4水平的下调与TNBC对雄激素受体抑制剂比卡鲁胺治疗的耐药性增加密切相关。 3.hsa-miR-19a-3p和hsa-miR-19b-3p可以靶向N6AMT1,且它们的上调参与TNBC的肿瘤发生，与TNBC不良预后相关。通过circBank数据库预测出hsa-miR-19a-3p和hsa-miR-19b-3p的共同上游circRNA——hsa_circ_0087377。 研究结论 N6AMT1在TNBC中表达下降，与不良预后相关。N6AMT1可能通过DLL4介导LAR型TNBC对AR抑制剂耐药，hsa_circ_0087377-miR-19a-3p/miR-19b-3p可能是其潜在上游。
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