摘要
公猪精液常温保存的质量决定人工授精（AI）技术的繁殖效率，进而影响养猪产业的经济效益。因此，不断优化和提升精液常温保存质量对于养猪生产中的繁殖效率具有重要意义。在精液常温保存中，除了稀释剂影响保存效果外，用于溶解稀释粉的水也十分重要。更有利于猪精液常温保存的稀释用水类别至今未有定论，因此，本试验选用生产中常用的稀释用水，探究不同稀释用水对常温保存猪精液质量、获能、糖代谢及氧化还原稳态的影响，并进行AI验证，借此为优化公猪精液常温保存方案提供参考依据。 试验1.不同稀释用水对常温保存猪精液质量的影响。试验选用超纯水、商品化矿物质水1、商品化矿物质水2、商品化纯净水进行探究。对常温保存8d各组精子动力学参数、活率、质膜完整率、顶体完整率、DNA碎片指数（DFI）、线粒体膜电位（MMP）、精液菌落数和pH进行检测。在精液保存第2d，超纯水组精子前向运动比例显著高于其他3组（Plt;0.05）。保存第4d，超纯水组总活力、直线运动比例、活率、质膜完整率高于其他3组（Plt;0.05），DFI低于其他3组（Plt;0.05），超纯水组MMP显著高于矿物质水组（Plt;0.05）。结果提示，超纯水组常温保存猪精液精子质量优于矿物质水组和纯净水组。 试验2.不同稀释用水对常温保存猪精液精子获能及糖代谢的影响。为了进一步确定不同稀释用水对常温保存猪精液精子获能及糖代谢的影响，对各组精子进行获能处理，检测获能前后精子Ca2+浓度；检测精子ATP、丙酮酸含量；用ELISA方法对葡萄糖转运蛋白（GLUT1）浓度、蛋白激酶A（PKA）、酪氨酸激酶（Try）、酪氨酸蛋白激酶（TPK）、已糖激酶1（HK1）和磷酸果糖激酶（PFK）活性进行检测。超纯水组精子获能后Ca2+浓度显著高于其他3组（Plt;0.05），精子ATP含量以及子PKA、Try、PFK活性显著高于其他3组（Plt;0.05）。结果提示，超纯水组常温保存精液精子获能后Ca2+内流增加，可能与cAMP/PKA通路PKA和Try活性升高有关，并且可能通过膜上GLUT1转运更多葡萄糖进入精子内部，提高能量代谢效率，促进精子获能。 试验3.不同稀释用水对常温保存猪精子氧化还原稳态的影响。目的是为了探究不同稀释用水对常温保存猪精子糖代谢的影响产生差异是否是通过氧化还原稳态失衡导致的。利用荧光探针DCFH-DA法检测各组精子活性氧（ROS）水平，使用生化检测试剂盒检测丙二醛（MDA）含量、抗氧化酶活性及精浆中过氧化氢（H2O2）、一氧化氮（NO）含量；用ELISA方法检测精子4-羟基壬烯酸（4-HNE）、8-羟基-2-脱氧鸟苷（8-OHdG）含量；用免疫印迹法检测精子SOD1、SOD2蛋白表达。超纯水组精子ROS水平、4-HNE生成显著低于其他3组（P lt;0.05），T-SOD活性及SOD1、SOD2蛋白表达显著高于其他3组（P lt;0.05），GSH-Px活性显著高于矿物质水1和纯净水组（P lt;0.05）。矿物质水2组精子8-OHdG含量（Plt;0.05）及精浆中NO、H2O2含量显著高于其他3组（Plt;0.05）。结果提示，超纯水组常温保存猪精液通过提高精子抗氧化酶活性，增加精子在常温保存过程中的抗氧化能力，降低ROS、4-HNE和8-OHdG的产生，可能是其在常温保存中改善精子质量的原因。矿物质水2组精液精浆中含有氧化产物高于其他组，可能是影响其质量的原因之一。 试验4.不同稀释用水对常温保存猪精液AI效果的影响。基于前3章试验发现，不同稀释用水会对常温保存猪精液中的精子质量、获能、糖代谢及氧化还原稳态产生影响，本试验进一步探究其在养猪生产中应用的效果。本试验选用134头纯丹系二元母猪进行AI，随机分为4组，超纯水组38头，矿物质水1组29头，矿物质水2组31头，纯净水组36头。采用深部输精方法对母猪进行AI，并使用B超检测仪检测28-35d母猪妊娠情况。结果表明，超纯水组常温保存精液5胎及以内胎次母猪窝产仔数、窝产活仔数和健仔数显著高于其他3组（Plt;0.05）。而对5胎以上胎次母猪繁殖性能没有影响。结果提示，超纯水组猪精液有助于提高5胎及以内胎次母猪繁殖效率。 综上所述，超纯水比纯净水、矿物质水更有利于在常温保存过程中猪精液精子质量，促进精子获能、糖代谢，维持精液中氧化还原稳态，提高AI效率。
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