摘要
傲大贴梗海棠‘东洋锦’（Chaenomeles × superba‘Crimson and Gold’）是蔷薇科（Rosaceae）木瓜属（Chaenomeles）落叶灌木，属于傲大贴梗海棠的观赏变异品种之一，该品种不但可以同株开出多色花，而且一朵花上能够同时出现多种颜色的复色花瓣，具有较高的观赏价值，是园林绿化和盆景制作的优良材料。组织培养不仅可以保持亲本的优良性状而且繁殖系数高，是工厂化育苗的主要形式之一，而再生及遗传转化体系的建立可以为植物遗传改良提供新的途径。本试验以春季的‘东洋锦’茎尖为材料，首次建立了其完整的组培快繁体系，并初步探索了其离体再生和遗传转化体系，主要结果如下: 1.组培快繁体系的建立 ‘东洋锦’茎尖的最佳消毒方式为75％乙醇消毒10 s,无菌水冲洗3次，2％NaClO浸泡8 min,无菌水冲洗3～5次，污染率为4.17％,褐化率25％,成活率可达75％;最佳增殖培养基为 MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.05 mg/L IBA+0.01 mg/L GA3，增殖系数达到6.87;最佳生根培养基为1/2 MS+0.6 mg/L IAA，生根率达39.97％;经过壮苗培养后，瓶内生根率可提高至46.30％;瓶外生根法更适合‘东洋锦’的快繁，生根率可达76.67％;在泥炭土∶蛭石=1∶2的混合基质中移栽成活率最高，为90％。 2.再生体系的初步研究 （1）直接再生体系的建立:MS+2 mg/LTDZ+0.2 mg/LIAA为‘东洋锦’叶片不定芽直接再生的最佳培养基，诱导率为4.44％。 （2）间接再生体系的探索:‘东洋锦’叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT;叶片愈伤组织增殖的最佳培养基为MS+0.6 mg/L 2,4-D+0.6 mg/L 6-BA;愈伤组织在不同分化培养基中均未获得再生植株。 3.遗传转化体系的初步研究 （1）将pBI121-mRFP载体转化根癌农杆菌GV3101并侵染‘东洋锦’叶片和叶片愈伤组织，侵染后的叶片伤口处逐渐变褐，未获得转基因植株;侵染后的叶片愈伤组织逐渐变褐，失去活性，未能获得转基因愈伤。 （2）将pBI121-mRFP载体分别转化发根农杆菌MSU440、ArQual、K599和C58C1并侵染‘东洋锦’无菌叶片、茎段、茎尖和木质化茎段。结果表明，叶片更适合作为发根农杆菌侵染的外植体，其中，MSU440和ArQual菌株能诱导叶片产生毛状根，平均诱导率分别为26.67％和16.6％,但是未检测到转基因毛状根。不同发根农杆菌菌株穿刺侵染‘东洋锦’组培苗的茎尖后，伤口处会形成较为致密的白色愈伤组织，但未能诱导出毛状根。不同发根农杆菌菌株侵染‘东洋锦’木质化茎段后，在茎段基部可以检测到转基因组织，但未能进一步形成转基因毛状根。其中K599菌株侵染茎段后，检测到转基因组织的效率最高，达到35.55％。
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