摘要
目的: 随着科技的飞速发展,人们在日常生活中受到各种因素的刺激.皮肤湿疹作为最具代表性的皮肤过敏性疾病之一,具有炎症性的特点.在许多国家,皮肤湿疹在儿童中的发病率达到30%,在成人中达到3%.皮肤湿疹不仅产生红斑、褶皱影响外观,而且伴随着瘙痒、疼痛等不良感受,更会导致外在因素趁虚而入破坏机体健康.因此,研发出预防和治疗皮肤湿疹的药物非常重要.皮肤湿疹作为一种过氧化性疾病,我们拟选择抗氧化药物作为研究方向.槲皮素具有抗氧化性,但其难溶于水等,生物利用度较低,临床应用存在一定的难点,我们拟设计将槲皮素制备出脂质体、凝胶、脂质体凝胶剂型,以研究如何将槲皮素的抗氧化活性发挥出应有的效果.通过筛选制备剂型的处方,考察不同剂型性状,建立体内外抗氧化活性考察模式,探究槲皮素及其相关剂型在小鼠皮肤湿疹模型上的作用,为将来治疗皮肤湿疹的提供新方法和新思路. 方法: 选择紫外分光光度法,以槲皮素浓度为横坐标,以在374nm吸收波长处的吸光度为纵坐标建立槲皮素标准曲线.以大豆磷脂和胆固醇作为脂质体基质,采取注入法制备槲皮素脂质体.以羧甲基纤维素钠作为凝胶基质,自然溶胀制备槲皮素水凝胶,主要考察脂质体的稳定性、包封率、粒径;考察水凝胶的粘度、稳定性等性状.将槲皮素脂质体均匀分散于凝胶中制备出槲皮素脂质体凝胶,在冷冻电子显微镜下观察其形态.利用Franz扩散池,以透析膜模拟生物膜,于扩散池中充满磷酸盐缓冲液,通过将设备保持恒温37℃及磁力搅拌器不停搅拌,模拟生物体内环境.通过测得数据代入标准曲线及公式计算药物释放率(R%)来比较不同剂型的体外透过效果. 将不同浓度的槲皮素及其各种剂型与DPPH溶液和H2O2溶液反应,颜色反应将直观体现出抗氧化作用,测得吸光度并计算清除率(E%).利用二硝基氯苯涂抹实验小鼠的皮肤使小鼠患皮肤湿疹,持续2天,5天后重复上述步骤,按照分组给小鼠背部皮肤涂抹槲皮素溶液、槲皮素脂质体、槲皮素凝胶、槲皮素脂质体凝胶,持续12天,第17天处死小鼠后取皮肤、肝脏和脾脏用于后续实验.每天测量小鼠背部皮肤厚度并拍照记录小鼠背部皮肤患病情况,背部皮肤切片、HE染色并观察,计算小鼠脾脏指数,取肝脏和皮肤匀浆进行丙二醛实验,初步探究了槲皮素脂质体凝胶对小鼠皮肤湿疹模型的治疗作用. 结果: (1)在0.5-1.6mg/mL范围内,槲皮素标准曲线方程为A=0.2741C-0.0417,R2=0.9991.(2)槲皮素脂质体基质中磷脂:胆固醇=3∶1,粒径:107±10.23nm,电位:-32.5±2.8mV,包封率:85.39±0.78%.凝胶基质选择2%的羧甲基纤维素钠,粘度与流动性较好.(3)释放度实验结果按从大到小顺序依次为:槲皮素凝胶、槲皮素脂质体、槲皮素脂质体凝胶、槲皮素溶液.脂质体凝胶对药物的释放起到了减慢的作用.(4)在DPPH溶液和H2O2溶液抗氧化实验中,槲皮素及其制剂的浓度与清除率体现出了正相关性,即浓度越大清除率越高.(5)在皮肤湿疹小鼠实验中,各组制剂对于疾病症状的痊愈产生了不同程度的促进效果,在用药周期结束时,均使小鼠患病皮肤恢复至正常状态,说明槲皮素抑制皮肤中的炎症因子.而以丙二醛作为常用的脂质被氧化指标,实验结果体现出了槲皮素较好的抗氧化性. 结论: 槲皮素通过处方筛选,我们制备出了稳定性较好的槲皮素脂质体和粘度优良、以羧甲基纤维素钠为基质的槲皮素水凝胶,在此基础上制备出了槲皮素脂质体凝胶,该剂型对皮肤无明显刺激性,透膜释放率较好,且具有一定程度缓释作用,在DPPH和H2O2实验中表现出含药浓度与清除率正相关的特性.结合槲皮素的抗氧化活性,我们对诱导出皮肤湿疹的小鼠进行预防及治疗实验,结果表明,虽然应用不同剂型后小鼠的恢复速度不同,但在实验周期结束时,各组用药小鼠患有湿疹的皮肤均恢复到与正常小鼠无异.且脂质体凝胶组表现出了我们希望的缓释作用.初步表明槲皮素脂质体凝胶作为一种使用方便、生物相容性好、抗氧化效果较好的剂型,用来预防和治疗皮肤湿疹是可行的,为之后治疗湿疹提供更多可能性.
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