摘要
目的 以不同产地的连翘为研究对象，利用现代分析技术结合化学计量学方法探讨不同产地间连翘药材的分子层面差异及有效成分含量，比较不同产地间的差异，为连翘药材的产地鉴别及质量评价提供分析方法。探讨连翘产地鉴别最适快速鉴别方法及准确性。 方法 利用傅里叶变换红外光谱法、电化学振荡指纹图谱法、高效液相色谱法对连翘建立指纹图谱，通过比较图谱间的差异和含量并结合化学计量学方法对不同产地间的连翘进行分析，对不同产地的连翘快速鉴别和质量评价。 结果 首先对连翘进行分子水平上的分析，通过傅里叶变换红外光谱法对不同产地的连翘进行官能团分析的结果可知，不同产地间的连翘红外光谱图近乎一致，即不同产地间的连翘红外吸收峰整体较为相似。通过对吸收峰进一步比较发现一些共有峰的吸收强度、峰型、峰位及峰的数目较为不同，为使结果更为具有代表性，对各个产地间的红外光谱图计算平均光谱进行比较。平均光谱显示各个产地间具有细小的差异，故结合化学计量学方法对其分析判别。利用马氏距离法剔除山东和山西两个异常值后分别建立主成分分析方法、簇类独立软模式法和偏最小二乘判别分析方法分析。结果表明簇类独立软模式法和偏最小二乘判别分析方法准确性均比主成分分析高，且三种分析方法中偏最小二乘判别分析方法分类最为准确，均为100%分类。 电化学振荡指纹图谱通过E-t曲线和特征参数对不同产地间的连翘进行图谱分析。笔者在前期实验室的基础上建立连翘的鉴别分析方法，并对连翘的试验方法、试验试剂浓度、稳定性、重复性、图谱特异性等方法学考察，结果表明各个指标的RSD值均≤3.0%；通过空白试剂图谱与药材图谱进行比较，探究药材对空白体系的干扰；最终确定试验条件为：硫酸浓度为3mol/L、硫酸铈铵浓度为0.005mol/L、丙二酸浓度为0.6mol/L、溴酸钠浓度为0.3mol/L，药材量为0.1500g、温度为310K、搅拌速率为600r/min、颗粒大小为80目。由于不同产地药材受环境等外界因素的影响，其电化学指纹图谱有着明显的不同。对每个产地的药材图谱进行逐一分析发现参考指标因产地有着明显的不同，各个产地的变异系数均≥10%，说明不同产地之间的参考指标有着较大的变异。 高效液相色谱法不仅能对不同产地间连翘的含量进行测定，同时也能对其进行差异分析和产地鉴别。本文以咖啡酸、槲皮素、连翘苷、连翘酯苷A、芦丁、山柰酚为测定指标，以甲醇-0.2%冰乙酸-水作为流动相测定连翘中6个指标成分的含量并对产地间的差异进行分析。首先对不同产地和每个产地平均含量进行相关性分析，结果表明各个产地间和每个产地平均含量的相关性均较高，不能将各个产地间的连翘进行划分；通过比较发现咖啡酸、芦丁和槲皮素是6个产地之间被测定指标含量异常的主要因素，对此3者进行箱线图分析表明陕西与安徽的数据有部分重合，其含量有相近的部分；聚类分析用来比较不同产地之间连翘含量的差异，聚类结果显示所有产地的药材均能够被正确分类，最终利用了高效液相色谱法实现了对不同产地连翘的含量测定和产地鉴别。 结论 三种方法均能实现连翘药材的准确鉴别，但三种方法均有各自的优缺点。傅里叶变换红外光谱可以从分子水平上判断不同药材之间的差异；电化学指纹图谱法可以从变异系数上反应特征指标之间的差异，进而判断药材的变异程度和产地鉴别；高效液相色谱法可以从含量测定和产地鉴别两方面对药材区分和质量评价。以上几种方法均为能为中药材连翘的产地鉴别及质量评价提供参考。
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