摘要
幽门螺杆菌(Helicobecterpylori，Hp)是一种寄居于胃黏膜的螺旋形细菌，被认为是胃溃疡和胃炎等胃部疾病的主要致病因素之一，也是国际癌症研究中心（IARC）认定的Ⅰ类致癌物。临床常用的四联疗法治疗幽门螺杆菌，其中抗生素易导致菌株产生耐药性，肠胃不适等问题。益生菌具有调节消化道生态平衡从而减少抗生素的副作用，且能够拮抗幽门螺杆菌，从而缓解幽门螺杆菌的感染。卵黄抗体（Immunoglobulinofyolk,IgY）因其具有较安全、高效、产量高和成本低等优点，极有可能成为替代抗Hp传统治疗的新方法。故本研究想从这两方面出发，制备拮抗幽门螺杆菌的片剂。 首先，本研究选取三株可拮抗幽门螺杆菌的罗伊氏乳杆菌：罗伊氏乳杆菌5K1（Lactobacillusreuteri5K1）、罗伊氏乳杆菌47L（Lactobacillusreuteri47L）、罗伊氏乳杆菌LR（LactobacillusreuteriLR），并验证共聚集能力及胃肠道穿越性。结果表明三株罗伊氏乳杆菌均有较强的共聚集能力，但罗伊氏乳杆菌LR没有穿越性，而罗伊氏乳杆菌5K1与罗伊氏乳杆菌47L具有穿越性。为进一步探究三株罗伊氏乳杆菌在体内缓解幽门螺杆菌感染的效果，验证穿越胃肠道屏障的重要性，故利用幽门螺杆菌感染小鼠的模型对三株罗伊氏乳杆菌进行动物实验效果评价。实验结果表明，有穿越性的罗伊氏乳杆菌干预后，降低了幽门螺杆菌感染小鼠的感染率、阳性率和死亡率，罗伊氏乳杆菌5K1干预组小鼠的感染率、阳性率和死亡率分别下降约47%、43%和70%，罗伊氏乳杆菌47L干预组小鼠的感染率、阳性率和死亡率分别下降约40%、53%和40%，qPCR和WB结果显示罗伊氏乳杆菌5K1与罗伊氏乳杆菌47L显著降低幽门螺杆菌感染小鼠胃内TNF-α、IL-1的mRNA表达，证明罗伊氏乳杆菌干预能够降低幽门螺杆菌感染引起的促炎细胞因子的产生，从而有效缓解幽门螺杆菌引起的胃部炎症。而没有穿越性的罗伊氏乳杆菌LR作为对照，结果是其干预幽门螺杆菌感染小鼠的感染率、阳性率和死亡率分别为4%、90%和70%。 其次，卵黄抗体具有良好的热稳定性、耐酸性，且产量大，卵黄抗体干预后，减少了幽门螺杆菌感染小鼠的感染率、阳性率和死亡率，分别下降了约57%、60%和70%，改善了幽门螺杆菌感染小鼠胃部炎症。且卵黄冻干粉可以改善片剂的口感和风味，其中的卵磷脂，作为天然的表面活性剂，有助于改善片剂口感，有利片剂在体内更好地崩解，也利于功能因子快速释放。本研究获得的抗幽门螺杆菌特异性的卵黄抗体，应用于制备益生菌片剂。 通过单因素实验和正交试验，以感官评分为指标，得到以罗伊氏乳杆菌菌粉与卵黄冻干粉为主要原料，脱脂奶粉添加量为50%，海藻糖添加量为20%，L-HPC添加量为3.5%，硬脂酸镁添加量为0.8%的益生菌片剂符合2020版《中国药典》的有关规定。 本研究通过体外细胞实验和体内动物实验，首次探究了罗伊氏乳杆菌在体内具有拮抗幽门螺杆菌的作用，可能与其穿越性有关；制备的特异性卵黄抗体，也具有较好的拮抗幽门螺杆菌的能力，研发了一款益生菌与卵黄抗体复配的新产品，可为研究非抗生素防治幽门螺杆菌提供选择。
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