摘要
多发性骨髓瘤（MM）是第二大常见的血液系统恶性肿瘤，其疾病特征是骨髓中的浆细胞恶性增殖，临床常见症状有肾功能障碍、出血、骨痛和高钙血症等。目前MM的治疗方法主要以传统化疗，自体造血干细胞移植（ACST）和新型靶向药物治疗为主。近些年出现的新药和治疗方案为MM的治疗带来了革命性进步，治疗疗效显著提高，生存期明显延长，卡非佐米（CFZ）这种蛋白酶体抑制剂就是其中的一种新药。CFZ是一种含有环氧酮基团的四肽，通过不可逆抑制蛋白酶体的胰凝乳蛋白酶活性起作用，因其具有高度选择性及不可逆抑制性，在对MM患者的疗效和安全性上较硼替佐米（BTZ）更具有优势。但CFZ在体内易迅速失活，静脉注射30min后，大部分CFZ（gt;95％）因其肽主链断裂和环氧化物水解而从全身循环中消除，因此亟需找到改善CFZ药代的方法。为此，人们设计了不同形式的纳米载体如脂质体、囊泡、胶束、脂质体纳米盘等来递送CFZ。然而，研究发现这些CFZ纳米药物虽然能改善CFZ的药代，但仍然存在许多不足，如CFZ载药量低、稳定性差、缺乏靶向性等。基于此，本文首先设计制备了一种达雷木单抗修饰的CFZ聚多肽胶束来实现原位MM的高效靶向化疗。 论文第一章主要对治疗MM的临床方式和效果，治疗MM的新药及分类，纳米药物用于MM的治疗和MM的治疗现状和发展方向进行了概述。 论文第二章设计制备了一种可高效包载CFZ和高效靶向CD38的CFZ聚多肽胶束（Dar-PMs-CFZ）用于MM的治疗。Dar-PMs-CFZ是由两亲性嵌段聚合物聚乙二醇-b-聚α氨基十六烷酸（mPEG5k-b-PAPA5.4k）和叠氮聚乙二醇-b-PAPA（N3-PEG5k-b-PAPA4.8k）通过溶剂交换法与CFZ共组装形成的，利用聚合物和药物的强疏水作用和多肽结构的相似性来实现稳定高效的包载，随后利用叠氮基团与二苯并环辛炔官能化的达雷木单抗（Dar-DBCO）发生点击化学反应在胶束表面修饰达雷木单抗（Dar）制备得到Dar-PMs-CFZ。该胶束CFZ载药量约6.0%，包封率约60%，粒径80nm左右，单抗的键合效率约50%。流式和激光共聚焦显微镜（CLSM）实验结果表明Dar-PMs-CFZ能够被高效内吞至CD38高表达的细胞中，当单个胶束表面修饰的Dar单抗为3.2个时内吞效果最强，进一步的细胞毒性实验也表明Dar3.2-PMs-CFZ具有最好的细胞杀伤效果，相比无靶组（PMs-CFZ）毒性提高约12倍。在原位LP-1LucMM小鼠肿瘤模型中开展的治疗实验表明，相较于CFZ-CD和无靶向PMs-CFZ组，Dar3.2-PMs-CFZ可显著抑制肿瘤增长并大幅延长生存期。腿骨的Hamp;E切片染色和TRAP染色结果也表明，Dar3.2-PMs-CFZ组具有较低的肿瘤细胞浸润和骨破坏程度。综上，Dar-PMs-CFZ可实现对蛋白酶体抑制剂CFZ在CD38高表达的MM小鼠原位模型中高效的递送和释放，提高了疗效，为MM的靶向治疗提供了一种有前景的治疗药物。 CFZ可以抑制蛋白酶体降解异常蛋白的功能，如果再增加一种能阻止聚集体产生的药物，就能同时抑制异常蛋白经蛋白酶体和聚集体途径代谢，让MM细胞不堪重负，最终死亡。论文第三章设计制备了一种可同时高效装载CFZ和帕比司他（PAN）、高效靶向CD38的聚多肽胶束（Dar-cPMs-CFZ/PAN）用于进一步提高MM的治疗效果。为了提高CFZ和PAN的载药量，利用多肽结构相似性和苯环之间π-π共轭作用，设计合成了新的两亲性嵌段聚合物聚乙二醇-b-聚（α氨基十六烷酸-co-苯丙氨酸）（mPEG5k-b-P(APA3.8k-co-PHE1.6k)），并用其与N3-PEG5.0k-b-PAPA4.8k两种聚合物，通过溶剂交换法与CFZ和PAN共组装形成双药胶束（cPMs-CFZ/PAN），然后在胶束表面修饰Dar得到Dar-cPMs-CFZ/PAN。Dar-cPMs-CFZ/PAN胶束的粒径约60nm，CFZ和PAN的载药效率可分别超过60%和70%。体外细胞毒性实验表明CFZ和PAN的最佳药物协同比是9：1（质量比），Dar2.4-cPMs-CFZ/PAN具有相对最低的半致死浓度。在原位LP-1-LucMM小鼠肿瘤模型中开展的初步治疗实验结果显示，靶向双药组的抗肿瘤活性明显强于无靶双药组和无靶单药组，且没有明显的系统毒性。进一步的体内实验将在优化给药量和Dar密度方面开展。 论文第四章对全文工作进行了总结并对下一步的工作进行了展望。
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