摘要
目的:为三化汤治疗高脂血症的可行性补充理论依据，探究三化汤是否对高脂血症具有确切疗效，预测三化汤治疗高脂血症的潜在机制并对通过实验进行机制验证。 方法:①通过中华医典(第五版)、国医典藏镜像版数据库(V2.0)、中国知网(CNKI)、万方数据知识服务平台、PubMed等数据库中检索三化汤、高脂血症相关的古今文献。②60只雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分成空白组、模型组、阳性对照组、三化汤低剂量组、三化汤中剂量组和三化汤高剂量组，每组10只。造模方法为高脂血症模型饲料喂养5周。对空白组和模型组小鼠灌胃注射0.1ml/10g生理盐水，阳性对照组灌胃注射0.1ml/10g浓度为10mg/kg的阿托伐他汀钙溶液，三化汤低剂量组灌胃注射含有1.85g/kg三化汤生药的溶液，三化汤中剂量组灌胃注射含有3.69g/kg三化汤生药的溶液，三化汤高剂量组灌胃注射含有7.38g/kg三化汤生药的溶液。给药4周后，对小鼠进行处死并采集样本，测量体重、肝指数、腹部脂肪指数、血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)、总甘油三酯(Total triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量，制作肝脏石蜡切片并对比各组指标和病理变化。③构建三化汤有效成分与靶点数据库，从中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)以及The Encyclopedia of Traditional Chinese Medicine(ETCM)、PubMed中收集大黄、枳实、厚朴、羌活的有效成分，利用Swiss Target Prediction网站对三化汤成分进行靶点预测和基因名转换。从Drugbank和OMIM数据库中收集与高脂血症相关的疾病靶点，利用String网站绘制蛋白-蛋白相互作用(Protein-protein interaction,PPI)网络。利用 Cytoscape 3.9.1 构建药物-靶点-靶点网络图，根据Genecards数据库中的Relevance值与网络图中Degree值得到核心靶点和核心成分。进行基因本体论(Gene Ontology，GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析。进行分子对接:在PDB网站下载其蛋白质晶体结构，在PubChem网站下载小分子的3D结构，利用Discovery Studio对核心靶点和核心成分进行处理，运用CDOCKER法进行分子对接。④基于蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测过氧化物酶体增殖物激活受体 α(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor alpha,PPARα)、3-经基-3-甲基戊二酰辅酶 A 还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGCR)在肝脏组织中的表达，PPARγ在腹部脂肪组织中的表达。 结果:①动物实验结果显示，相比模型组，三化汤高剂量组小鼠的体重、肝指数和腹部脂肪指数明显降低，但低、中、高剂量组之间表观指标差异并不显著。肝脏石蜡切片显示，三化汤可降低小鼠的肝脏脂肪变性程度。血清生化检测显示，三化汤可显著降低小鼠血清中的TC、TG和LDL-C水平，但对HDL-C并无明显升高作用。②网络药理学研究发现三化汤治疗高脂血症的核心靶点为HMGCR、PPARα、PPARγ、NPC1L1、NR1H4,得到核心成分30种，如5,7,8,4''-四甲氧基黄酮、木犀草素、土大黄苷元、异紫芩素等，分子对接结果显示核心靶点与核心分子具有较强相互作用力。KEGG分析显示，三化汤降低血脂的作用可能与Age-rage信号通路、胰岛素抵抗、脂质-动脉粥样硬化信号通路、PPAR信号通路有关。③WB发现三化汤组小鼠肝脏中HMGCR表达量降低，PPARα表达量显著提高，且腹部脂肪中的PPARγ表达量显著提高，说明三化汤可能通过减少胆固醇合成和增强脂肪酸氧化对高脂血症发挥治疗作用。 结论:从中医传统理论来看，大黄、枳实、厚朴破气导滞，逐瘀化痰，羌活发散宣透，升清开窍，四药合用，既能通下开玄，又可理气开玄，故可用于痰瘀腑实之证。本研究表明，三化汤在降低血清TG、TC、LDL-C方面具有优势，其功效可能与上调PPARα、PPARγ及下调HMGCR表达有关，从而使肝脏细胞的脂肪酸氧化代谢增强、胆固醇合成减少，使脂肪细胞对脂肪酸的摄取、储存、代谢功能增强。因此，三化汤在治疗痰瘀腑实型高脂血症上具有一定优势，同时对三化汤治疗高脂血症作用机制的探讨为临床上高脂血症的防治可提供更多思路。
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