摘要
滑子菇是一种珍贵的食药用真菌,它在生长过程中会出现一种特殊的表型——即菌盖表面出现滑液,在滑子菇原基形成分化阶段、生长阶段分泌滑液,在成熟后,菌盖开伞弹射孢子时停止分泌;滑子菇在工业生产过程中菌种存在严重的分类混乱问题,对滑液含有的成分不了解,且滑液形成的机制未见解析。 本文以此为切入点,首先收集了工业生产中的9种滑子菇栽培品种,通过形态学观察菌丝形态、颜色变化、生长速度与菌落边缘形态、拮抗实验等,而后再结合分子生物学技术,进行ITS测序得出最终结果;对滑液、滑子菇菌丝胞内营养成分和抗氧化性能测定,筛选出一株性能较好的菌株为实验菌种,对其进行液体培养基优化,并通过转录组测序对滑液形成机制进行初步解析,研究结果如下: (1)滑子菇分类结果:9种滑子菇品种在分类学水平上鉴定出三种菌种,分别为小孢鳞伞种(Pholiota microspra),光帽鳞伞种(Pholiota nameko),柠檬鳞伞种(Pholiota limonella)。 (2)菌丝体胞内及滑液测定结果:在营养成分方面,9种菌种多糖含量、蛋白含量、Ve含量、Vc含量方面H-9综合含量最高;在抗氧化性能方面,抗氧化物质、抗氧化功能、抗氧化酶方面H-9综合性能最强;以上结果为根据筛选综合含量最高的品种H-9为目的菌种,以供后续研究。 (3)H-9培养基优化结果:以H-9为供试菌种,通过响应面优化分析了碳源、氮源、无机盐和生长因子等九种因素H-9菌丝生物量的影响,筛选出了最适液体培养基的成分组合。经PB试验得出液体培养的最佳碳源为玉米淀粉、最佳氮源为黄豆粉、最佳无机盐为硫酸镁。结合中心组合试验及响应面法分析,得到优化后培养基配方为:玉米淀粉47.40g/L,黄豆粉的最佳浓度为55.71g/L,MgSO4的最佳浓度为6.36g/L,此时菌丝生物量(Y)达到最大值为4.18g/L。同未优化培养基菌丝生物量相比,产量提升了2.83倍。 (4)滑液机制初探:将测序结果注释在GO、KOG、KEGG数据库中,结合所有的差异基因的注释结果,以不同差异分组共有的差异基因、log2FoldChange值、pvalue为指标进行筛选,得到13条与表型密切相关的差异基因,其中Cluster-6756.10,Cluster-6756.6,Cluster-7437.5参与调控囊泡运输,运输与分解代谢;Cluster-8242.2,Cluster-7158.6,Cluster-6641.3参与蛋白质的合成;Cluster-6021.12参与碳水化合物的合成;Cluster-2676.1,Cluster-7065.16,Cluster-7415.13参与脂质代谢,Cluster-5044.5,Cluster-8234.0,Cluster-8028.4参与辅助因子与维生素类代谢、能量代谢等重要的生命活动,共同完成滑子菇表面滑液产生与分泌这一生理过程。