摘要
癌症是影响人类健康和寿命的主要疾病之一，免疫治疗已成为临床上癌症治疗的重要手段。肿瘤免疫微环境的状态对免疫疗法的效果至关重要，其中调节性T细胞（Treg）异常积聚并表达免疫抑制分子，促进T细胞耗竭，抑制效应T细胞的抗肿瘤免疫反应，是肿瘤免疫治疗抵抗的一种途径。已有文献报道凋亡抑制蛋白CFLARL可促进T细胞增殖发育、增加CD25表达等，因而CFLARL蛋白水平对于肿瘤化疗和免疫治疗效果都是重要影响因素。 前期工作中筛选到E3泛素连接酶BTBD6是CFLARL的相互作用蛋白之一，并可负性调控非小细胞肺癌细胞CFLARL蛋白水平。本研究中用Alpha Fold2预测了二者存在相互作用位点，co-IP实验证实二者可以结合。在乳腺癌细胞、T细胞中也发现过表达BTBD6引起CFLARL的泛素化降解，化疗药物Oxaliplatin（L-OHP）可上调细胞中BTBD6并使CFLARL水平下降，细胞凋亡增加。敲低BTBD6,则减弱了L-OHP诱导肿瘤细胞和T细胞凋亡的作用。 利用Crispr-cas9技术构建了C57BL/6Btbd6基因敲除小鼠，在此基础上的小鼠肺癌细胞LLC1移植瘤（正常表达BTBD6）实验表明，与野生型雌性小鼠相比，Btbd6-/-雌性小鼠中移植瘤Ki-67水平更高，流式细胞术分析显示其脾脏及瘤内CD4+CD25+Treg细胞显著增加，CD8+T细胞无显著差异，免疫荧光染色结果显示瘤内CFLARL+FOXP3+细胞显著增多，也证明瘤内Treg细胞显著增加。雄性小鼠变化趋势相同，但无显著差异;野生型或Btbd6-/-小鼠与自发乳腺癌MMTV-PyVT小鼠杂交获得自发乳腺肿瘤Btbd6+/+/Btbd6-/-小鼠，与Btbd6+/+小鼠相比，Btbd6-/-小鼠的自发乳腺肿瘤更大且个数更多，Ki-67免疫组化染色和CD8、CFLARL、FOXP3免疫荧光染色结果提示肿瘤生长和瘤内Treg浸润增加，且有显著性差异，提示BTBD6可能通过调控Treg影响了肿瘤免疫微环境。 上述结果表明，BTBD6促进抗凋亡蛋白CFLARL泛素化-蛋白酶体途径降解,增强化疗药物诱导的肿瘤细胞和T细胞凋亡;降低BTBD6水平可稳定CFLARL，促进细胞存活。敲除小鼠Btbd6，不仅通过促进肿瘤细胞的存活、增殖促进肺癌移植瘤和自发乳腺肿瘤的发生和发展，还通过增加Treg存活和肿瘤浸润，促进肿瘤的免疫逃逸，形成有利于肿瘤的发生发展的肿瘤免疫微环境。BTBD6为提高肿瘤化疗和免疫治疗效果提供了新靶点。
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