摘要
药食同源的马齿苋(Portulaca oleracea L.)是马齿苋科的一年生草本植物，享有“全球灵丹妙药”的美誉，生物活性多样，得到了广泛应用。课题组前期发现马齿苋水提物具有显著的抗炎活性，目前该水提物的精制物已被用于功效性护肤品中。此外，诸多研究亦报道了马齿苋水提物的神经保护、抗动脉粥样硬化、改善氧化损伤等活性，但其药效物质基础的研究仍不深入。为了阐明马齿苋水提物活性发挥的物质基础，本论文以马齿苋水溶性成分为切入点，对马齿苋多糖和水溶性小分子进行了分离鉴定和与活性评价。本论文的研究内容及结果如下: (1)马齿苋中多糖的纯化、结构解析与活性研究。采用95％乙醇脱脂、水提醇沉和季铵盐离子交换等手段获得6个马齿苋粗多糖，并通过分光光度法、UV分析、HPGPC分析和单糖组成分析等比较了 6个粗多糖的化学成分、分子量分布和单糖组成等理化性质。粗多糖经分级醇沉和DEAE阴离子交换柱层析法纯化，获得2个分子量分布均一的马齿苋多糖POL40dl(Mw=64100 Da)和POL60ql(Mw=21000 Da),并通过化学及光谱波谱手段研究了多糖POL40dl和POL60ql的结构。单糖组成分析表明POL40dl由半乳糖醛酸(GalA)组成，POL60ql由葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)组成，二者比例为1.00∶3.29。综合IR、甲基化和NMR分析结果，POL40dl是由α(1→4）糖苷键连接而成的，发生了部分酯化的线性半乳糖醛酸聚糖，甲酯化程度为9.71％，乙酰化程度为0.34％;POL60ql具有1,4-连接的β-D-Galp主链，主链半乳糖残基的O-6被1，4-连接的α-D-Glcp和1，6-连接的α-D-Glcp残基取代。免疫调节活性评价发现中性糖POL60ql在安全浓度范围内，能通过促进RAW264.7细胞中P65、IκB-α的磷酸化从而激活NF-κB信号通路，显著增加NO分泌和iNOS的表达，表现出潜在的免疫增强活性。 (2)马齿苋中水溶性小分子的分离、鉴定与活性研究。首先利用聚酰胺树脂、AB-8大孔树脂、RP-18、正相硅胶柱层析以及半制备高效液相等分离手段从马齿苋60％乙醇提取物中分离纯化得到11个小分子化合物(1-11),包含8个水溶性吲哚啉生物碱(1-8)，1个苯乙醇衍生物(9),1个黄嘌呤生物碱(10)和1个木脂素糖苷(11)，其中化合物10-11为首次从马齿苋中分离得到。然后采用DPPH法对分离所得化合物的抗氧化活性进行了评价，结果表明化合物5、7-10具有显著的DPPH自由基清除活性，IC50值在18.42～33.11μM之间。其中，化合物 7(IC50=19.80 μM)和 10(IC50=18.42 μM)活性超过阳性对照 VC(IC50=27.47 μM)。鉴于抗氧化活性和黑色素抑制活性紧密相关，在此基础上进一步探究了化合物1-11对B16F10细胞黑色素生成的抑制活性。结果显示当给药浓度均为400μM时，化合物2、3和9对α-MSH诱导的黑色素生成抑制活性要强于阳性对照(α-熊果苷和曲酸)，其中化合物9的黑色素生成抑制率达到了 64.43％。 (3)对马齿苋的营养成分、活性成分以及药理活性进行了全面的综述，并对马齿苋未来的研究作出了展望。该综述为本论文的深入研究提供了有力支撑，也将有助于未来对马齿苋研究的补充与完善。 综上所述，本论文对马齿苋水溶性成分进行了研究，获得2个均一多糖和11个水溶性小分子化合物，并对其进行了结构表征与活性评价。均一多糖POL60q1通过激活NF-κB信号通路，显著增加NO分泌和iNOS的表达，从而表现出免疫增强活性。部分小分子化合物显示出显著的DPPH自由基清除活性和一定的抑制黑色素生成活性。本论文的研究结果为阐明马齿苋的物质基础和拓展其新用途打下了坚实的基础。
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