摘要
目的:西洋参为五加科植物西洋参的干燥根茎，在我国中医用药历史上最早可追溯至清朝，《本草从新》和《本草再新》中均有记载。我国西洋参资源丰富、分布集中，是世界第一大西洋参出口国。多糖是西洋参生物活性的主要成分之一。本项目对西洋参粗多糖提取、分离和纯化获取中性多糖（AGP-A），进行结构表征和抗炎活性研究，以期为西洋参中性多糖的开发利用提供指导。 方法:利用水提醇沉法提取西洋参粗多糖和Sevage试剂法除蛋白;通过离子交换层析柱分离粗多糖和凝胶柱纯化得到均一分子量AGP-A;利用红外色谱、液相色谱、气相色谱、核磁对AGP-A的结构进行表征;采用Raw264.7细胞和斑马鱼模型评价AGP-A的抗炎活性。 结果:（1）500g西洋参干燥根茎经过水提醇沉法得到75 g粗多糖，得率为15％。（2）75 g粗多糖经过Sevage试剂除蛋白得到60g，脱蛋白率为80％。（3）30g粗多糖经过DEAE-52分离得到中性多糖AGP-A 12.8 g,得率为43％。（4）凝胶色谱纯化2 g中性多糖AGP-A,得到均一分子量的AGP-A212mg,得率为10.6％。（5）AGP-A的分子量为5561 Da。（6）单糖测定结果显示AGP-A的单糖主要为葡萄糖（Glc）。（7）甲基化结果表明AGP-A有四种链接顺序:Glcp-（1→、→4）-Glcp-（1→、→6-Glcp-（1→、→4,6）-Glcp-（1→。（8）核磁结果分析表明AGP-A的主链连接方式为→4）-α-D-Glcp-（1→的糖苷键，而端基 α-D-Glcp-（1→6）-α-D-Glcp-（1→通过→4,6）-α-D-Glcp-（1 →的O-6键连接在主链上。（9）在脂多糖刺激的Raw264.7细胞炎症模型中，20 μg/mL最低浓度的AGP-A对炎症因子分泌的影响无明显统计学差异。40 μg/mL浓度的AGP-A对炎症因子（TNF-α、IL-1β）分泌的影响有统计学差异，可抑制炎症因子的分泌。80μg/mL浓度的AGP-A可抑制炎症因子NO、IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌，有统计学差异。高浓度100μg/mL给药可以明显降低炎症因子（NO、L-1β、IL-6、TNF-α）分泌量，对IL-10分泌量无明显影响。（10）在斑马鱼模型中，发现AGP-A在较高浓度（50μg/mL、100 μg/mL）时，对CuSO4诱导的嗜中性粒细胞向尾部侧线神经丘的迁移具有明显抑制作用，在低浓度时(5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL)时无明显统计学差异。 结论:西洋参中性多糖AGP-A由葡萄糖连接而成，分子量为5561 Da,化学结构:主链以一4)-α-D-Glcp-(1→的糖苷键链接，支链 α-D-Glcp-(1 →6)-α-D-Glcp-(1→通过→4,6)-α-D-Glcp-(1→的O-6键连接在主链上。AGP-A在Raw264.7细胞和斑马鱼炎症模型中表现出良好的抗炎活性。
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