摘要
胆囊癌(gallbladder carcmoma，GBC)在胆道系统属于一种常见的恶性肿瘤，它是指发生于胆囊各个部位，包括发生在胆囊内部（胆囊底、体、颈部）以及胆囊管的消化道恶性肿瘤。中国胆囊癌年新发病例约5.3万，年死亡病例约4.1万，发病率逐年上升，然而诊断为胆囊癌的患者5年总体生存率不到5%，预后极差且术后生活质量不高。因此，探索胆囊癌的新型治疗靶点以及更加有效的治疗方法是非常有必要的。密蛋白Claudins (CIDN)是一组参与细胞紧密连接结构形成的膜蛋白，主要存在于内皮或上皮细胞中，其在恶性肿瘤中高表达，并且它与患者预后不良相关。虽然CLDN参与恶性肿瘤的进展，但它与胆囊癌之间的关系目前并没有深入研究。 目的： 本研究探讨CLDN-1在原发性胆囊癌中的表达情况并分析其临床意义，为后续进一步探讨原发性胆囊癌发病机制、寻找肿瘤标志物和治疗靶点提供新思路。 方法： 1、采用GEPIA数据库筛选胆囊癌中差异表达的基因；通过GEPIA数据库分析CLDN-1在原发性胆囊癌以及其他消化道恶性肿瘤中表达情况；通过GEPIA数据库分析CLDN家族在胆囊癌中的差异表达；通过GEPIA数据库分析CLDN-1与胆囊癌差异性表达基因的相关性。运用LinkedOmics数据库进行CLDN-1共表达基因及功能富集分析，然后通过LinkedOmics的GSEA功能模块分析CLDN-1在胆囊癌发病机制的信号通路和生物作用。 2、应用qPCR法检测CLDN-1 mRNA在胆囊癌组织及其癌旁正常组织中表达情况。 3、通过免疫组织化学染色的方法检测CLDN-1蛋白在原发性胆囊癌、癌旁组织、胆囊腺瘤、慢性胆囊炎中的表达情况。 4、通过Western blot实验检测胆囊癌组织及其对应癌旁组织中CLDN-1蛋白表达情况。 5、应用SPSS22.0统计软件进行统计分析。以p＜0.05差异有统计学意义。对CLDN-1蛋白表达情况、病理分级、临床TNM分期、血清CEA浓度、血清CA199浓度等资料数据应用卡方检验、秩和检验进行分析研究CLDN-1蛋白表达情况与各临床病理特征之间关系；根据随访结果，以OS为观察结局，采用log-rank检验进行分析并绘制KM生存曲线。 结果： 1、本研究发现CLDN-1蛋白在原发性胆囊癌中表达上调，与患者不良预后相关。 2、CLDN-1的共表达基因通过紧密连接结构(TJ tight junction)、CAMs及EGFR等通路参与了胆囊癌的发生发展；CLDN-1的共表达基因在细胞连接组织形成、胆道系统发育、间质细胞增殖、外分泌系统发育等过程中发挥积极作用，并参与侧质膜、血液微粒、高尔基腔、纤毛等形成过程，同时可调控锚蛋白、跨膜受体蛋白激酶、细胞黏附介质、细胞黏附分子等的活性。 3、CLDN-1 mRNA在胆囊癌组织中表达高于癌旁正常组织。 4、CLDN-1蛋白表达与肿瘤病理分级有关，低分化胆囊癌组织CLDN-1蛋白表达强度高于高+中分化胆囊癌组织；CLDN-1蛋白高表达的患者血清CA199浓度高于低表达情况的患者；CLDN-1蛋白表达情况与患者肿瘤分期相关，CLDN-1蛋白低表达患者胆囊癌TNM分期早于高表达患者；CLDN-1蛋白高表达的患者与CLDN-1低表达患者相比较，CLDN-1蛋白高表达患者淋巴结转移可能性更大。 5、CLDN-1蛋白表达情况与胆囊癌患者年龄、性别、肿瘤组织学类型、肿瘤标志物CEA水平等情况无关。 6、CLDN-1蛋白阳性表达的患者术后总体生存期比CLDN-1蛋白阴性表达的患者术后总体生存期更短。 结论： CLDN-1蛋白在胆囊癌中高表达，与患者肿瘤病理分级、肿瘤临床TNM分期、血清CA199浓度、有无淋巴结转移等相关；CLDN-1蛋白阳性表达患者术后总体生存时间更短。在胆囊癌中，CLDN-1可能通过参与TJ、CAMs、EGFR等通路影响胆囊癌发生发展。CLDN-1蛋白是诊断原发性胆囊癌及判断患者预后的潜在生物标志物和治疗靶点。
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