摘要
鹅的生物学特性比较特殊，在育雏阶段，容易受到如气温骤变、疫苗注射、水体环境污染等环境因素的影响而引起应激反应，使雏鹅生长受阻、免疫器官发育不良、免疫功能被抑制，这也是养鹅产业中，雏鹅的发病率和死亡率攀高的原因之一。研究发现，此类雏鹅还伴随着免疫功能水平低下、胸腺T细胞发育不良等现象。白术多糖（PAMK）作为白术的主要成分，对机体具有重要的免疫增强作用。我们前期研究证实，白术多糖可以促进胸腺中T细胞的发育，然而T细胞的发育及分化与胸腺微环境及胸腺细胞的状态有关，进一步促进T细胞发育有利于胸腺的发育及提高机体的免疫功能。因此，本试验使用环磷酰胺（CTX）构建雏鹅免疫抑制模型，模拟雏鹅免疫低下及胸腺T细胞发育不良等现象，探索白术多糖对雏鹅胸腺T细胞的保护作用及机制。 为评估PAMK能否参与调控CTX处理后雏鹅的T淋巴细胞的增殖、分化和发育，本试验采取单因素法随机设计，试验分组及处理：32只1日龄的马岗鹅，公母各半，随机分为4组（n=8），分别为CON组、PAMK组、CTX组和PAMK＋CTX组。CON组和CTX组，在饲养过程中正常饮水和进食；PAMK组和PAMK＋CTX组，在饲养过程中正常饮水并饲喂含有PAMK（400 mg/kg）的基础饲料。在第19、20、21日龄，CTX组和PAMK＋CTX组的雏鹅每日腿肌注射CTX（40 mg/kg·BW）注射液，CON组和PAMK组每日腿肌注射灭菌生理盐水0.5 mL，在第28日龄采集胸腺组织冻存。结果：（1）H＆E切片结果显示：CTX组胸腺细胞排列疏松，形态异常，皮质和髓质分界不清楚，胸腺小叶间隔变窄，胸腺小体损伤；而PAMK＋CTX组的细胞形态紧密正常，皮质和髓质分界明显，胸腺小体中心的细胞核消失，已变性解体。（2）透射电镜和扫描电镜结果显示：CTX组的淋巴细胞发生皱缩的现象，CON组和PAMK组的淋巴细胞形态结构基本正常，PAMK＋CTX组只有少量的淋巴细胞发生萎缩和凋亡。（3）Tunel检测结果显示：CTX组的淋巴细胞凋亡率相比CON组和PAMK组显著增加；而相比CTX组，PAMK＋CTX组的淋巴细胞凋亡率显著下降。（4）RT-qPCR检测组织中与T淋巴细胞分化、发育相关的细胞因子和趋化因子，结果显示：与CTX组相比， PAMK＋CTX组的IL-6、IL-7、TNF-α、SCF、CCL1、CCL19、CCL21、CCL22和CXCL12的mRNA表达显著下降，而IL-2、IL-4和GM-CSF无显著变化。（5） WB检测结果显示：与CTX组，PAMK＋CTX组的IL-2、IL-7、TNF-α、CCL1、CCL19和CXCL12的蛋白分泌水平显著下降，而IL-6、IL-18、SCF和GM-CSF无显著变化。 为探索PAMK能否参与调控CTX处理后雏鹅的T淋巴细胞的增殖、分化和发育，降低CTX引起的细胞凋亡和死亡，我们进行了转录组分析，分析其中相关分子机制。结果显示：（1）GO富集分析结果显示，与CTX组相比，PAMK＋CTX组的通路主要富集在Focal adhesion、ECM-receptor interaction、Chemokine等信号途径。（2）KEGG结果分析显示趋化因子信号通路发挥重要作用，与CTX组相比，PAMK＋CTX组具有调节通路中相关基因的趋势，为了验证趋化因子信号通路是否在对淋巴细胞增殖、分化和发育中起作用，使用RT-qPCR和WB方法分别检测信号通路中关键基因，结果显示与CTX组相比，PAMK＋CTX组（CCL5和CCR5）的mRNA表达显著下降。与CTX组相比PAMK＋CTX组（CCL5和CCR5）的mRNA表达显著升高。 本研究表明CTX会引起胸腺损伤导致T细胞的凋亡和死亡，而在饲粮中添加一定量的PAMK能够缓解这一症状，具体分子机制为：PAMK通过调节趋化因子信号通路促进T细胞的增殖，调节T细胞的状态，降低细胞凋亡和死亡的比率，缓解CTX引起的胸腺中T细胞形态改变和凋亡的情况，起到保护雏鹅免受损伤的作用。
NETL