摘要
高脂血症（Hyperlipidaemia）是一种因长期摄入高能量食物和缺乏运动而导致的脂质代谢异常疾病，是诱发心血管疾病的主要危险因素，因此高血脂症防治尤其重要。佛手(Citrus medica L. var. Sarcodactylis Swingle)作为芸香科柑橘属植物，因富含多元生物活性成分而备受认可。多糖被认为是佛手的关键活性成分，具有炎症抑制、抗氧化、抗恶性肿瘤、免疫调节等活性效能。基于两者关系，本研究从佛手多糖中提取、分离纯化出FCP-N1和FCP-N2两个组分，并对其进行结构表征和体外降脂活性评价，选取效果更佳的FCP-N2进行后续实验。通过高脂饮食建立高血脂症小鼠模型，探究FCP-N2对高血脂症的治疗效果及作用机制。 经热水浸提得到佛手粗多糖，并测定其得率为8.52±0.14%，水溶性百分比为38.42±0.78%，持水性百分比为15.51±0.62%。经过分离与纯化得到FCP-N1和FCP-N2两个组分，其分子量分别为138.133kDa和46.351kDa，呈丝网状结构。其单糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成，两者皆具有吡喃糖环。FCP-N1主要由[→5)-Ara(f)-(1→]和[→4)-Gal(p)-(1→]相连接而成，而FCP-N2主要由[→t)-Ara(f)-(1→]、[→5)-Ara(f)-(1→]及[→4)-Gal(p)-UA-(1→]残基组成，两种多糖均含有1,5→连接的Ara(f)残基。 体外降脂实验表明：FCP-N1、FCP-N2均具有牛磺胆酸钠和甘氨胆酸钠结合能力，同时具备胆固醇吸附作用。进一步实验证实它们对胆固醇酯酶及胰脂肪酶活性具有效抑制效应，这些特性表明其具有一定降血脂功效。结果显示，浓度为2mg/mL时， FCP-N1和FCP-N2的牛黄胆酸盐结合率分别为36.62%和38.33%，甘氨胆酸盐结合率为43.38%、45.31%；当pH为2.0时，FCP-N1的胆固醇吸附量为13.99mg/g，FCP-N2为18.95mg/g，当pH为7.0时，FCP-N1胆固醇吸附量为24.90mg/g，FCP-N2为30.01mg/g；在相同的浓度条件下，FCP-N1和FCP-N2的胆固醇酯酶抑制率分别为54.82%和57.21%；当浓度为2.0mg/mL时，FCP-N1和FCP-N2的胰脂肪酶抑制率分别为60.36%和69.56%，由此可看出组分FCP-N2的降脂能力更佳，因此选择FCP-N2作为研究对象，进行后续降脂功能研究。 建立以高脂饮食诱导的高脂血症小鼠模型，并进行FCP-N2干预，进而评价佛手多糖对高血脂症小鼠的降血脂作用。结果表明：通过不同剂量的FCP-N2干预后，小鼠的血清指标Total Cholesterol（TC）、Triglyceride（TG）、Low-Density Lipoprotein Cholesterol （ LDL-C ）、Alanine Aminotransferase （ ALT ）及Aspartate Amino Transferase（AST）活性明显下降，而High-density Lipoprotein Cholesterol（HDL-C）水平明显上升。小鼠的抗氧化水平Superoxide Dismutase （ SOD ）、Glutathione Peroxidase （ GSH-Px ）、Catalase （ CAT ）明显提高，脂质代谢酶指标Fatty Acid Synthase （ FAS ）、Acetyl Coenzyme A Carboxylase （ ACC ）水平显著下降， Lipase lipoprotein （ LPL ）、Hepaticlipase （ HL ）显著上升。结合组织病理学观察可得， FCP-N2的干预使高血脂症小鼠的脂肪含量降低，抗氧化能力提高，使得脂质代谢水平总体提高。 基于AMPK/ACC及PPARα/LXRα两条降脂通路验证FCP-N2干预的高血脂症小鼠的降血脂水平，采用Western blot和qRT-PCR技术分析其蛋白和基因的表达水平，发现FCP-N2通过上调AMPK、ACC以及PPARα、LXRα的蛋白及基因水平从而实现抑制高脂及并发症等代谢异常疾病发生。
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