摘要
目的: 以历代医家对失眠的理论及实践经验认识为基础，提出心神失养是失眠发病的基础，安神是中医临床治疗失眠重要治则，迄今为止，研究大多是对中药复方、中药药对或中西医结合治失眠的研究，而单味药疗效的对比研究相对较少。通过构建对氯苯丙氨酸致失眠模型小鼠，观察养血安神中药首乌藤（低剂量组、高剂量组）、化痰宁心中药制远志（低剂量组、高剂量组）与养心安神中药炒酸枣仁（低剂量组、高剂量组）对失眠小鼠一般状况及睡眠的影响，并以小鼠脑组织睡眠相关神经递质、激素及蛋白表达为观测指标，探讨实验药物干预失眠小鼠的可能机制，以期为中医临床辨证选药提供实验依据。 方法: 构建对氯苯丙氨酸（PCPA）致失眠模型小鼠，实验共分为9组，随机将造模成功的小鼠分为8组，每组10只，设为模型组、阳性药组、炒酸枣仁水提取物（低剂量组、高剂量组）、制远志水提取物（低剂量组、高剂量组）和首乌藤水提取物（低剂量组、高剂量组），另外空白对照组10只，各实验组小鼠均按照2ml/100g灌胃量给药，连续7d，空白对照组和模型组给予生理盐水灌胃，阳性药组给予艾司唑仑混悬液灌胃;余各组分别予以相应浓缩水煎剂灌胃。观察实验中药对失眠小鼠一般状况（精神状态、皮毛颜色、对外界的反应、摄食量、饮水量、有无死亡、小鼠造模前后及最后一次给药后的体重）、入睡潜伏期及睡眠持续时间，并用酶免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠脑组织神经递质及激素含量水平（5-HT、GABA、Glu、NE、MT、CRH）以及Western blotting检测Clock及BMAL1蛋白的表达。 结果: 1 对实验小鼠一般情况的影响 造模前各实验组小鼠体重无显著性差异。造模后，模型组小鼠与空白组相比呈激惹状态，抓取时反抗较剧烈，精神萎靡，皮毛枯槁蓬乱;实验结束时，除制远志高剂量组外，各给药组小鼠一般情况均明显好于模型组，毛发光泽，体重均增加明显。制远志高剂量组小鼠进食差，精神稍萎靡，皮毛略有枯槁蓬乱现象。除远志高剂量组、首乌藤低剂量组外，阳性药组、炒酸枣仁高剂量组、炒酸枣仁低剂量组、首乌藤高剂量组、制远志低剂量组小鼠体重均显著高于模型组（P＜0.05）。 2 不同类别安神中药对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响 2.1 不同类别安神中药对实验小鼠入睡潜伏期的影响 与空白对照组比较，模型组小鼠入睡潜伏期显著延长（P＜0.05）,提示造模成功。与模型组小鼠比较，阳性药组、炒酸枣仁低剂量组、炒酸枣仁高剂量组、首乌藤低剂量组、首乌藤高剂量组、制远志低剂量组、制远志高剂量组小鼠入睡潜伏期均著缩短，其中炒酸枣仁高剂量组更为明显，但与阳性药比较，无统计学差异;同种中药高低剂量组见比较，炒酸枣仁高剂量组明显优于低剂量组（P＜0.05）。 2.2 不同类别安神中药对小鼠睡眠持续时间的影响 与空白对照组比较，模型组小鼠睡眠持续时间明显缩短（P＜0.05），提示造模成功。与模型组比较，炒酸枣仁高剂量、制远志低剂量组、首乌藤高剂量组均能显著延长小鼠睡眠持续时间，差异有统计学意义（P＜0.05），其中制远志低剂量组＞炒酸枣仁高剂量组＞首乌藤高剂量组;炒酸枣仁低剂量组、首乌藤低剂量组、制远志高剂量组均有延长睡眠持续时间的趋势，但无统计学意义;与阳性药组比较，制远志低剂量组小鼠睡眠持续时间无显著性差异（P＞0.05）;同组中药高低剂量组比较，制远志低剂量组较高剂量组更能显著延长小鼠睡眠持续时间（P＜0.05）。 3 不同安神中药对PCPA失眠模型小鼠脑组织神经递质及激素含量水平的影响 3.1 不同安神中药对失眠模型小鼠脑组织5-HT含量的影响 实验结果显示，模型小鼠脑组织5-HT含量显著低于空白对照组，提示造模成功。与模型组比较，阳性药组、首乌藤高剂量组、首乌藤低剂量组、酸枣仁高剂量组、酸枣仁低剂量组小鼠5-HT含量均明显增加（P＜0.05），而远志高、低剂量组均未见明显增加（P＞0.05）。与阳性药对照组比较，首乌藤高剂量组、首乌藤低剂量组、酸枣仁高剂量组、酸枣仁低剂量组小鼠脑组织5-HT含量均无显著性差异（P＞0.05）。同种中药高低组间比较，均无显著性差异（P＞0.05）。各中药组小鼠脑组织5-HT含量比较，首乌藤高剂量组＞首乌藤低剂量组＞酸枣仁高剂量组＞酸枣仁低剂量组，但组间比较无显著性差异（P＞0.05）。 3.2 不同安神中药对失眠模型小鼠脑组织GABA含量的影响 实验结果显示，模型小鼠GABA含量显著低于空白对照组，提示PCPA可导致失眠小鼠脑组织GABA合成或分泌减少。与模型组比较，阳性药组、酸枣仁高剂量组小鼠脑组织GABA含量均明显增加（P＜0.05），而远志低剂量组、首乌藤低剂量组、首乌藤高剂量组小鼠脑组织GABA含量均有增加的趋势，但无统计学意义（P＞0.05），提示高剂量炒酸枣仁可增加失眠小鼠脑组织GABA含量而发挥助眠作用。同种中药高低组间比较，均无显著性差异（P＞0.05）。各中药组之间比较，均无显著性差异（P＞0.05）。 3.3 不同安神中药对失眠模型小鼠脑组织Glu含量的影响 实验结果显示，模型小鼠脑组织Glu含量显著高于空白对照组，提示PCPA可导致失眠小鼠脑组织Glu合成或分泌增加。与模型组比较，阳性药组、制远志高剂量组、制远志低剂量组、炒酸枣仁高剂量组、首乌藤低剂量组小鼠脑组织Glu含量均明显降低（P＜0.05），而炒酸枣仁低剂量组、首乌藤高剂量组均未见显著性降低（P＞0.05），提示远志、炒酸枣仁、首乌藤可通过降低失眠小鼠脑组织Glu含量发挥助眠作用。同种中药高低剂量组比较，均无显著性差异（P＞0.05）。中药组间比较，均无显著性差异（P＞0.05）。 3.4 不同安神中药对失眠模型小鼠脑组织NE含量的影响 实验结果显示，各实验组小鼠脑组织NE与模型组比较均无显著性差异（P＞0.05）;各中药组之间比较未见显著性差异（P＞0.05）;同种中药高低剂量组比较，未见显著性差异（P＞0.05）。 3.5 不同安神中药对失眠模型小鼠脑组织MT含量的影响 实验结果显示，模型组小鼠脑组织MT显著低于空白对照组，提示PCPA 可导致失眠小鼠脑组织MT合成或分泌减少。与模型组比较，阳性药组、首乌藤低剂量组、炒酸枣仁高剂量组、首乌藤高剂量组小鼠脑组织MT含量均明显增加（P＜0.05），而远志低剂量组、炒酸枣仁低剂量组、远志高剂量组均有增加的趋势，但无显著性差异（P＞0.05），提示首乌藤、炒酸枣仁可通过增加失眠小鼠脑内MT含量而发挥助眠作用。同种中药高低剂量组间比较，均无显著性差异（P＞0.05）。各中药组之间比较，均无显著性差异（P＞0.05）。 4 不同安神中药对失眠模型小鼠脑组织Clock、BMAL1蛋白表达影响 与空白对照组比较，模型组Clock、BMAL1蛋白表达量均显著下降（P＜0.05），提示PCPA可干扰失眠小鼠的昼夜节律;与模型组比较，阳性药组、炒酸枣仁组（低剂量组、高剂量组）、首乌藤组（低剂量组、高剂量组）、制远志组（低剂量组、高剂量组）Clock、BMAL1蛋白表达量均有所上升，其中BMAL1蛋白仅阳性药组增加差异有统计学意义（P＜0.05），而Clock蛋白仅制远志低剂量组增加更明显（P＜0.05），提示低剂量远志可通过增加Clock蛋白发挥调节睡眠昼夜节律的作用。同组中药高低剂量组比较均无明显差异（P＞0.05）。详见图10和图11。 结论: 1 制远志高剂量组小鼠进食差，精神稍萎靡，皮毛略有枯槁蓬乱现象，说明大剂量远志可能有一定的毒副作用，临床应用远志应避免剂量过大。炒酸枣仁组（高、低剂量）、首乌藤高剂量组均对小鼠体重增加显著。 2 炒酸枣仁组（低剂量组、高剂量组）、首乌藤组（低剂量组、高剂量组）及制远志组（低剂量组、高剂量组）均能显著缩短阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠入睡潜伏时间，增加小鼠睡眠持续时间。其中炒酸枣仁高剂量组缩短小鼠入睡潜伏期时间最显著;制远志低剂量组延长小鼠睡眠持续时间最为显著。 3 炒酸枣仁可能通过促进小鼠神经递质5-HT、GABA、MT合成和分泌，首乌藤则通过促进小鼠神经递质5-HT、MT合成和分泌，降低Glu能神经系统而发挥安神助眠作用，而制远志主要通过降低小鼠脑组织Glu含量和增加GABA含量而发挥维持睡眠的作用。 4 首乌藤低剂量组、首乌藤高剂量组、炒酸枣仁高剂量组、炒酸枣仁低剂量组小鼠脑组织CRH含量均明显降低。 5 阳性药组、炒酸枣仁组（低剂量组、高剂量组）、首乌藤组（低剂量组、高剂量组）、制远志组（低剂量组、高剂量组）Clock、BMAL1蛋白表达均较模型组有上升趋势，其中阳性药组BMAL1蛋白的表达增加有统计学意义，制远志低剂量组Clock蛋白的表达增加有显著性差异。
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