摘要
杜仲作为杜仲科落叶乔木，雌雄异株其中雄花量大易于采集，多分布于河南、湖南等地，杜仲皮、叶、花均有药用价值。西汉时已发现杜仲具有强筋壮骨、安胎等功效，雄花是我国非常珍贵的花粉资源，具有降压、保肝补肾、降血脂、抗炎、抗肿瘤、镇静催眠等多种药理作用。 利用网络药理学和分子对接技术对雄花有效成分进行分析，并运用液质联用仪器测定雄花中活性成分及含量，结合中药指纹图谱技术对雄花质量控制提供参考。利用紫外分光光度计测定雄花中多糖成分的含量，气质联用仪器测定雄花中多糖水解后单糖组成，利用体外细胞实验验证雄花有效成分的抗癌活性，为癌症的治疗提供参考。 通过“成分-靶点”及“靶点-疾病”网络图分析得出槲皮素、山奈酚、(-)-Tabernemontanine、白桦脂酸、表奎宁定、β-谷甾醇、D-酒石酸、表儿茶素、柚皮素为关键成分，与非特异性癌症、精神分裂症、乳腺癌、炎症、心血管疾病相关性较高。将雄花与乳腺癌的交集靶点进行差异基因互作分析得到核心靶点包括AKT1、TNF、IL6、INS、TP53、IL1B、CASP3、PTGS2。结合KEGG及GO分析可知雄花中有效成分的相关靶点参与的信号通路对癌症和炎症有抑制作用。通过分子对接技术证实小分子配体和蛋白受体对接结合能均小于-5 kJ/mol。经热图分析确认雄花最佳提取工艺是75%甲醇为提取溶剂，料液比为1∶20，加热回流 2 h。最佳提取工艺下共得到雄花活性成分 51 种，中药指纹图谱相似度结果大于0.8，说明建立的指纹图谱稳定可靠。通过体外细胞活性实验验证雄花提取物对于MCF-7、231、4T1、HepG2、116、Raw264.7细胞存活率均有抑制作用。 利用紫外可见分光光度计绘制葡萄糖标准曲线得到雄花中多糖含量为21.92%，多糖成分提取物对于MCF-7细胞存活率无明显抑制作用，对HepG2细胞存活率有抑制作用。将多糖水解后利用GC-MS检测得到其中单糖组成为鼠李糖∶核糖∶甘露糖∶阿拉伯糖；半乳糖∶木糖∶葡萄糖=3.14∶1.12∶3.38∶1.70∶1.69∶11.22∶28.61。
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