摘要
目的： 肝脏疾病是全球目前最严重的健康问题之一，损伤性因素持续存在导致肝脏疾病慢性进展。近年来研究发现部分慢性肝病患者合并EB病毒（Epstein-Barr virus, EBV）活动复制。EBV是一种致炎致癌病毒，感染人体后可长期潜伏于体内，当机体免疫紊乱时，可导致EBV再激活。为明确EBV再激活对慢性肝病进展的影响，本研究拟对EBV活动复制的慢性肝病患者的临床特征进行系统分析，并对EBV可能激活的与慢性肝病进展相关的基因进行筛查，以利于疾病的早期识别，及时干预，预后评估及丰富EBV再激活对慢性肝病进展的作用机制。 方法： 1.收集2019年1月-2023年12月于重庆医科大学附属第一医院感染科住院的EBV活动复制（EBV+）慢性肝病患者和EBV未活动复制（EBV-）慢性肝病患者的资料信息。采用倾向性评分匹配法（Propensity score matching，PSM）处理以保证组间基线资料的一致性，经PSM匹配后，统计分析患者的一般资料、血常规、肝肾功、电解质、凝血象、乙肝两对半、HBV-DNA定量、影像学资料、Child-pugh评分与分级及MELD评分与分级等指标。 2.通过genecard网站进行生信分析，筛选出EBV+组和EBV-组慢性肝病患者外周血单个核细胞（ Peripheral blood mononuclear cell ， PBMC）和肝组织中得分差异较大的4个基因：肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α， TNF-α）、转化生长因子β1 （ Transforming growth factor-β1，TGF-β1）、信号传导和转录激活因子3（Signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）和核磷脂素1（Nucleophosmin 1， NPM1）；同时收集入组的11例EBV+和13例EBV-的慢性肝病患者外周全血标本，通过逆转录实时定量 PCR （ Reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction，RT-qPCR）技术验证以上4个差异表达的基因。 结果： 1.慢性肝病患者共231例；EBV+组96例（41.6%），其中慢性乙型肝炎20例（20.8%），乙肝肝硬化46例（47.9%），非乙肝肝硬化30例（31.3%）；EBV-组135例（58.4%），其中慢性乙型肝炎49例（36.3%），乙肝肝硬化32例（23.7%），非乙肝肝硬化54例（40.0%）。 2.EBV+组慢性肝病患者年龄大于EBV-组（P＜0.05），尤其是在年龄≥60岁的患者在两组中所占比例的统计学差异更为显著（ P＜0.05）；在经PSM处理后匹配所得的慢性肝病患者中，相较于EBV-组， EBV+组慢性肝病患者的丙氨酸氨基转移酶（ Alanine aminotransferase，ALT）、乳酸脱氢酶（Lactic dehydrogenase，LDH）、甲胎蛋白（Alpha fetoprotein，AFP）、D-二聚体（D-dimer，D-D）、纤维蛋白降解产物（Fibrin degradation products，FDP）均显著升高（P值均＜0.05），但胆碱酯酶（Cholinesterase，CHE）、血钠浓度则明显降低（P值均＜0.05）。 3.慢性乙型肝炎患者中，与EBV-组比较，EBV+组慢性乙型肝炎患者的血小板计数（Platelet，PLT）、ALT、AFP、凝血酶时间（Thrombin time，TT）、纤维蛋白原（Fibrinogen，FIb）均明显升高（P值均＜0.05）；同时EBV+组患者在门静脉主干直径、脾脏大小上较EBV-组的差异也具有统计学意义（P值均＜0.05）。 4.肝硬化患者中，和EBV-组比较，EBV+组肝硬化患者的碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、LDH、D-D均显著升高（P值均＜0.05），但CHE却明显下降（P=0.038）；且EBV+组肝硬化患者在Child.Pugh分级中也较EBV-组更重（P=0.039）。而在纳入分析的乙肝肝硬化患者中，相较于EBV-组，EBV+组乙肝肝硬化患者的HBV-DNA载量、淋巴细胞绝对值、直接胆红素（Direct bilirubin，DB）、ALT、AST、ALP、AFP、PT、INR、TT均明显升高（P值均＜0.05），但凝血酶原活动度（Prothrombin activity，PTA）、HBsAg表达水平却显著降低（P值均＜0.05）；同时EBV+组乙肝硬化患者在MELD分级上较EBV-组的程度更重，其差异具有统计学意义（P=0.034）。 5.通过RT-qPCR技术验证显示，相对于EBV-慢性肝病患者，EBV+慢性肝病患者PBMC中目标基因TNF-α表达水平显著升高（P=0.025），而目标基因TGF-β1、STAT3、NPM1的表达无统计学差异（P值均＞0.05）。 结论： 1.慢性肝病患者体内活动复制的EBV多来自体内潜伏EBV的再激活，而并非原发感染（96例EBV+慢性肝病患者中84例患者存在EBV既往感染）。EBV活动复制加重慢性肝病患者肝脏炎症和凝血功能障碍，增加门脉压力，降低肝硬化患者肝脏合成功能和储备功能，加剧终末期肝病的严重程度。 2.EBV活动复制可促使慢性肝病患者PBMC中TNF-α表达上调，进而激活其下游信号通路而加重肝脏病变。
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