摘要
目的:拟采取动物实验的方法，探寻补气通窍方(Buqi Tongqiao Formula,BQTQF)对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)大鼠 TLR4/NF-κB信号通路及相关血清炎症因子的影响，进一步揭露补气通窍方对变应性鼻炎的防治机制，为补气通窍方的推广提供理论基础。 方法:选取SPF级Wistar大鼠作为实验对象，实验步骤分两步。第一步将50只大鼠以随机数字表法分为5组:对照组、模型组和补气通窍方低、中、高剂量组，每组各10只。除对照组外均使用卵清蛋白抗原佐剂混悬液建造AR模型，补气通窍方低、中、高剂量组分别给予BQTQF 14.38g/(kg·d)、28.76g/(kg·d)、57.55g/(kg·d)灌胃给药，模型组给予4ml/d纯净水灌胃，每次滴鼻、灌胃后记录30min内大鼠动物行为学评分，ELISA检测外周血免疫球蛋白E(IgE)的浓度，常规苏木精-伊红染色(HE)观察大鼠鼻黏膜病理损伤。确定最佳给药量后，第二步将40只大鼠以随机数字表法分4组:对照组、模型组、补气通窍方组和鼻炎康组，每组各10只。模型组处理方式同第一步，补气通窍方组灌胃剂量为57.55g/kg/d,鼻炎康组给予鼻炎康462.5 mg/(kg·d)灌胃。记录大鼠动物行为学评分，HE染色观察大鼠鼻黏膜病理损伤，ELISA检测大鼠外周血IgE、白介素4(IL-4)和白介素10(IL-10)含量，Western Blot检测大鼠脾组织中TLR4、NF-κB p65蛋白含量，RT-PCR检测大鼠脾组织中TLR4、NF-κB p65 mRNA表达情况以验证实验猜想。16S rRNA基因测序检测肠道内容物乳杆菌相对丰度变化。 结果:（1）动物行为学积分:造模大鼠在第一次行鼻腔激发后，30 min内出现喷嚏、抓鼻和流涕的症状。滴鼻阶段，造模大鼠动物行为学评分叠加＞5分，提示造模成功。灌胃阶段，同天数观察到，相比于对照组，模型组评分明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）;相比于模型组，补气通窍方低、中、高剂量组大鼠动物行为学评分有所降低，高剂量组降低最明显，中、高剂量组从第2d起明显低于同时期模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 （2）HE染色:对照组鼻黏膜假复层纤毛柱状上皮清晰可见，固有层无水肿、充血等炎症性改变。模型组鼻黏膜纤毛排列杂乱，见较多嗜酸性粒细胞等炎性细胞浸润，腺体数量明显增加。补气通窍方低剂量组可见黏膜上部分纤毛恢复，固有层仍有水肿和充血。补气通窍方中剂量组可见部分纤毛恢复，固有层水肿、充血减轻;补气通窍方高剂量组和鼻炎康组固有层黏膜较为完整，炎性细胞浸润程度较模型组明显减少，无明显腺体增生，鼻组织病理损伤好转。 (3)ELISA 检测: 第一批大鼠:相比于对照组，模型组血清IgE水平在AR大鼠血清中浓度明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）;相比于模型组，补气通窍方低、中、高剂量组血清IgE浓度水平有所降低，高剂量组下降最为明显，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 第二批大鼠:相比于对照组，模型组血清IgE、IL-4水平在AR大鼠血清中浓度明显升高，IL-10浓度明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）;相比于模型组，补气通窍方组和鼻炎康组血清IgE、IL-4水平在AR大鼠血清中浓度明显降低，IL-10浓度明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 （4）Western Blot检测:相比于对照组，模型组大鼠脾脏组织中TLR4、NF-κB p65蛋白含量明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）;相比于模型组，补气通窍方组和鼻炎康组大鼠脾脏组织中TLR4、NF-κB p65蛋白含量明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (5)RT-PCR检测:相比于对照组，模型组大鼠脾脏组织TLR4、NF-κB p65 mRNA含量明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05);相比于模型组，补气通窍方组和鼻炎康组大鼠脾脏组织TLR4、NF-κB p65 mRNA含量明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 (6)16S rRNA检测:在科水平上，乳杆菌科相对丰度对照组＞补气通窍方组、鼻炎康组＞模型组(P均＜0.05)。 结论:(1)补气通窍方高剂量组对变应性鼻炎大鼠症状缓解最为明显，灌胃剂量为 57.55 g/(kg·d)。 (2)补气通窍方可缓解变应性鼻炎大鼠鼻部炎症，减少炎性细胞浸润，恢复鼻黏膜病理形态。 (3)补气通窍方对变应性大鼠血清促炎因子IgE和IL-4具有抑制作用，能够提高抗炎因子IL-10含量，补气通窍方对变应性鼻炎的防治机制可能与其相关。 (4)补气通窍方可以上调AR大鼠肠道菌群中乳杆菌科相对丰度。 (5)补气通窍方对AR大鼠TLR4/NF-κB信号通路具有调节作用，可以下调TLR4、NF-κB p65 mRNA表达水平，达到变应性鼻炎的防治效果。
NETL