摘要
目的:探讨黄花倒水莲总皂苷对HepG2肝癌细胞的抑制作用及其潜在的作用机制，为抗肝癌药物的研发提供实验依据。 方法:采用乙醇超声波提取法从黄花倒水莲的根茎部萃取黄花倒水莲总皂苷粗提物，利用D101大孔吸附树脂层析柱法分离纯化黄花倒水莲总皂苷粗提物及紫外分光光度法测定黄花倒水莲总皂苷的含量，采用超高效液相色谱-质谱联用(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)技术鉴定黄花倒水莲总皂苷的化学成分。采用CCK-8细胞增殖实验、划痕实验、transwell实验和流式细胞术分别检测不同浓度黄花倒水莲总皂苷对HepG2肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。利用网络药理学预测黄花倒水莲总皂苷的抗肝癌作用机制并通过Western blot方法检测核心靶点及凋亡相关蛋白。 结果:黄花倒水莲根茎部经萃取和分离纯化后得到黄花倒水莲总皂苷，其总皂苷含量为18.41％。采用UPLC-MS/MS技术对黄花倒水莲总皂苷进行鉴定，共鉴定出72种化合物，主要包含皂苷类、萜类、有机酸类、脂肪酸、酚酸类、生物碱等化合物，其中皂苷类化合物在所有类型成分中占比最高(25.52％),tenuifolin为皂苷类主要成分。CCK-8细胞增殖实验结果发现，不同浓度的黄花倒水莲总皂苷分别作用于HepG2肝癌细胞12h、24h、36h、48h、60h、72h后，黄花倒水莲总皂苷对HepG2肝癌细胞增殖的抑制率呈显著的时间-浓度依赖性(P＜0.001);划痕实验和Transwell实验结果显示，高浓度黄花倒水莲总皂苷可显著抑制HepG2肝癌细胞的迁移和侵袭;流式细胞术检测结果表明，黄花倒水莲总皂苷可以剂量依赖性诱导HepG2肝癌细胞凋亡，并将细胞周期阻滞在G0/G1期(P＜0.001)。通过网络药理学研究发现，黄花倒水莲总皂苷发挥抗肝癌作用的活性成分主要包括2-(4-Benzyl-1-piperazin-yl)-N2-(4-Benzyl-1-pipera-zinyl)-N-(2-ethoxyphenyl)acetamide,tenuifolin,Cystalgerone,vernalic acid和1-Hydroxy-3,7-dimethoxy-xanthone;作用核心靶点主要包括AKT1、EGFR、STAT3、TNF、CTNNB1和BCL-2等;KEGG分析发现，主要富集信号通路包括Kaposi肉瘤相关的单纯疱疹病毒感染、PI3K-AKT信号传导途径、脂质与动脉粥样硬化和乙型肝炎等。Western blot检测结果表明，黄花倒水莲总皂苷可以显著抑制AKT1磷酸化，下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达并促进促凋亡蛋白Caspase-3的表达，从而诱导HepG2肝癌细胞凋亡。 结论:黄花倒水莲总皂苷可以显著抑制HepG2肝癌细胞增殖和迁移，并通过多种途径诱导HepG2肝癌细胞凋亡，具有显著的抗肿瘤活性，为后续中药治疗肝癌研究提供了实验依据。
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