摘要
目的：以昆明小鼠为实验对象，构建α-鹅膏毒肽（α-amanitin，α-AMA）诱导的中毒性肝损伤模型，通过虾青素的干预，探究虾青素对α-鹅膏毒肽诱导的小鼠肝损伤的保护作用及保护机制。 方法：（1）α-鹅膏毒肽染毒剂量及染毒时间筛选：选择30只昆明小鼠，随机分为5组，每组6只，分别为对照组、0.3、0.45、0.6、1.0mg/kgα-AMA染毒组，腹腔注射染毒后，比较染毒后24h和48h肝酶和肝脏系数。（2）虾青素给药剂量选择：小鼠分成7组：空白对照组、α-AMA模型组、橄榄油组、低剂量虾青素组（20mg/kg）、中剂量虾青素组（40mg/kg）、高剂量虾青素组（80mg/kg）以及水飞蓟宾（20mg/kg）组。0.45mg/kg剂量α-AMA腹腔注射染毒，同时连续给予相应剂量虾青素以及水飞蓟宾48h。短期实验每组6只，比较48h后各组小鼠体重、肝脏指数、肝酶、氧化应激指标以及小鼠肝脏病理等。长期实验每组10只，观察小鼠28天的生存情况。（3）虾青素给药方式选择：小鼠分成7组：空白对照组、α-AMA模型组、橄榄油组、低剂量虾青素组、中剂量虾青素组、高剂量虾青素组以及水飞蓟宾组，每组10只。提前连续48h给药虾青素和水飞蓟宾，48h后染毒，同时继续给药48h，记录小鼠28天的生存情况。（4）虾青素对α-鹅膏毒肽诱导肝损伤机制研究：小鼠分成6组：空白对照组、单独虾青素组、α-AMA模型组、橄榄油组、虾青素干预组以及水飞蓟宾干预组，每组6只。提前48h给虾青素，检测染毒48h后的肝脏系数、生化、氧化应激指标、炎症指标及相关基因mRNA表达情况。 结果：（1）染毒48h，α-AMA组ALT及AST显著高于对照组（P＜0.05）；随着染毒剂量增加，小鼠ALT和AST逐渐升高，其中0.45mg/kg组小鼠肝酶升高明显，并且48h未出现小鼠死亡。（2）48h短期实验显示：与对照组比较，模型组肝脏指数显著下降，ALT、AST显著升高，肝组织中抗氧化酶CAT、SOD、GSH-PX、GSH均显著下降，MDA含量增加，差异均有统计学意义（P＜0.05），肝脏病理有明显肝细胞肿胀、炎细胞浸润、肝细胞坏死等表现；与模型组比较，各剂量虾青素组上述指标均明显改善，差异均有统计学意义（P＜0.05）。28天长期实验显示：除对照组外，48h后各组均有小鼠陆续死亡，其中模型组3d内死亡率90%，橄榄油组4d内死亡率100%，高剂量虾青素组小鼠7d内死亡率80%，28d后各组小鼠存活率不超过20%。（3）当提前48h给虾青素再染毒α-AMA时，模型组小鼠28天全部死亡，随着虾青素给药剂量升高，小鼠存活率依次增加。低剂量、中剂量、高剂量虾青素组以及水飞蓟宾组的存活率分别为：40%、40%、80%、90%。（4）和α-AMA模型组相比较，虾青素治疗组ALT、AST显著降低（P＜0.05），组织CAT、SOD、GSH-PX、GSH显著升高（P＜0.05），MDA显著降低（P＜0.05），炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α显著降低。和空白对照组想比较，α-AMA模型组Nrf2、HO-1、NFκB、IκBα的mRNA表达水平升高（P＜0.05），而虾青素的治疗显著降低Nrf2、HO-1、NFκB、IκBα的mRNA表达水平，其中HO-1、IκBα差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论：（1）选择0.45mg/kg及48h作为动物模型的染毒剂量及染毒时间。（2）从短期实验来看，不同剂量虾青素对α-鹅膏毒肽诱导肝损伤均有一定疗效，而且高剂量虾青素（80 mg/kg）疗效最好，从长期实验看，同时给α-鹅膏毒肽和虾青素虽然能延长小鼠存活时间，但并未显著提高远期生存率。（3）提前给予虾青素对α-鹅膏毒肽诱导的肝损伤有较好的保护作用。（4）虾青素可能通过激活Nrf2/HO-1以及NFκB/IκBα治疗α-鹅膏毒肽诱导的肝损伤。
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